| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-13页 |
| 1 绪论 | 第13-23页 |
| ·研究意义 | 第13-14页 |
| ·WRKY转录因子国内外研究现状和发展趋势 | 第14-21页 |
| ·WRKY转录因子的概述 | 第14-15页 |
| ·WRKY转录因子参与的生理调控 | 第15-19页 |
| ·WRKY转录因子的克隆 | 第19-20页 |
| ·过表达载体构建和RNAi沉默技术 | 第20-21页 |
| ·遗传转化 | 第21页 |
| ·高通量测序 | 第21页 |
| ·试验研究内容以及技术路线图 | 第21-23页 |
| ·试验研究内容 | 第21-22页 |
| ·试验技术路线图 | 第22-23页 |
| 2 WRKY转录因子基因的克隆 | 第23-48页 |
| ·试验材料、试剂和仪器设备 | 第23-24页 |
| ·植物试验材料 | 第23页 |
| ·试验试剂及菌种 | 第23页 |
| ·试验仪器设备 | 第23-24页 |
| ·慈竹WRKY转录因子的克隆 | 第24-32页 |
| ·慈竹笋总RNA的提取 | 第24-25页 |
| ·慈竹cDNA的合成 | 第25-26页 |
| ·慈竹WRKY转录因子克隆 | 第26-30页 |
| ·慈竹WRKY基因的生物信息学分析 | 第30-32页 |
| ·结果分析 | 第32-46页 |
| ·慈竹WRKY基因全长克隆 | 第32-37页 |
| ·慈竹WRKY基因生物信息学分析 | 第37-46页 |
| ·结果与讨论 | 第46-48页 |
| 3 慈竹Be WRKY基因的组织表达模式分析 | 第48-55页 |
| ·试验材料、试剂和仪器设备 | 第48页 |
| ·植物材料 | 第48页 |
| ·主要试剂 | 第48页 |
| ·仪器设备 | 第48页 |
| ·Be WRKY基因的模式表达分析 | 第48-51页 |
| ·慈竹各组织的总RNA提取 | 第48-49页 |
| ·慈竹各组织的cDNA的合成 | 第49页 |
| ·慈竹Be WRKY和Tublin基因real-time引物设计 | 第49页 |
| ·Real-time PCR引物特异性检测 | 第49-50页 |
| ·Real-time PCR体系与反应程序 | 第50-51页 |
| ·数据处理 | 第51页 |
| ·结果与分析 | 第51-54页 |
| ·慈竹各组织慈竹笋RNA提取 | 第51-52页 |
| ·Real-time PCR引物特异性检测结果 | 第52-53页 |
| ·慈竹Be WRKY基因的表达分析 | 第53-54页 |
| ·结论与讨论 | 第54-55页 |
| 4 胁迫处理对Be WRKY1和Be WRKY2基因转录水平表达的影响 | 第55-66页 |
| ·试验材料、试剂以及设备仪器 | 第55-56页 |
| ·植物材料 | 第55页 |
| ·试验试剂 | 第55页 |
| ·试验仪器设备 | 第55-56页 |
| ·试验方法 | 第56-60页 |
| ·慈竹幼苗的培育和胁迫处理 | 第56-58页 |
| ·胁迫处理后总RNA的提取 | 第58页 |
| ·胁迫处理后cDNA的合成 | 第58页 |
| ·慈竹WRKY和Tublin基因real-time引物设计 | 第58页 |
| ·Real-time PCR引物特异性检测 | 第58页 |
| ·Real-time PCR体系与反应程序 | 第58页 |
| ·数据处理 | 第58-59页 |
| ·胁迫处理后组织中糖含量的测定 | 第59-60页 |
| ·结果与分析 | 第60-64页 |
| ·植物表型分析 | 第60-61页 |
| ·胁迫处理下慈竹RNA提取 | 第61页 |
| ·慈竹Be WRKY 1和Be WRKY 2基因在各种胁迫下差异性表达分析 | 第61-63页 |
| ·胁迫处理下慈竹叶中可溶性糖含量的变化分析 | 第63-64页 |
| ·结论与讨论 | 第64-66页 |
| 5 慈竹Be WRKY 1、Be WRKY 2过表达载体的构建 | 第66-78页 |
| ·试验材料及仪器 | 第66页 |
| ·试验菌种、质粒及试剂 | 第66页 |
| ·试验主要仪器 | 第66页 |
| ·试验方法 | 第66-74页 |
| ·Be WRKY1 和Be WRKY 2 全长基因过表达引物设计 | 第66-67页 |
| ·Be WRKY1 和Be WRKY 2 基因全长（ 含有酶切位点 ）的扩增 | 第67-68页 |
| ·Be WRKY1 和Be WRKY 2 全长基因 ( 含有酶切位点 ) PCR产物的胶回收和连接 | 第68-69页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备和转化 | 第69页 |
| ·菌落蓝白斑筛选、摇菌和质粒提取 | 第69页 |
| ·pGM-T-Be WRKY 1 质粒和pGM-T-Be WRKY 2 质粒以及pCAMBIA 1303 质粒双酶切 | 第69-70页 |
| ·pGM-T-Be WRKY 1 质粒、pGM-T-Be WRKY 2 质粒和pCAMBIA 1303质粒酶切胶回收 | 第70页 |
| ·过表达载体pCAMBIA - Be WRKY1 和pCAMBIA-Be WRKY 2的构建 | 第70-71页 |
| ·阳性克隆的筛选以及双酶切验证 | 第71-74页 |
| ·结果分析 | 第74-77页 |
| ·Be WRKY1和Be WRKY 2基因全长（ 含酶切位点 ）的扩增以及pCAMBIA 1303质粒酶切 | 第74-75页 |
| ·Be WRKY1和Be WRKY 2基因植物过表达载体的构建质粒PCR以及双酶切验证 | 第75-77页 |
| ·结论 | 第77-78页 |
| 6 慈竹Be WRKY 1、Be WRKY2 RNA i表达载体的构建 | 第78-91页 |
| ·试验材料及仪器 | 第78页 |
| ·试验菌种、质粒以及试剂 | 第78页 |
| ·试验仪器 | 第78页 |
| ·试验步骤 | 第78-87页 |
| ·pCAMBIA - Be WRKY 1 - RNA i和pCAMBIA - Be WRKY2 - RNA i载体构建流程 | 第78-82页 |
| ·Be WRKY1 和Be WRKY 2 基因RNA i表达载体引物设计 | 第82页 |
| ·Be WRKY1 和Be WRKY2 RNA i目的片段的扩增 | 第82-83页 |
| ·Be WRKY1 和Be WRKY2 RNA i目的片段回收和连接 | 第83-84页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备和转化 | 第84页 |
| ·菌落蓝白斑筛选、摇菌和质粒提取 | 第84页 |
| ·中间表达载体pSK-Be WRKY - RNA i的构建 | 第84-87页 |
| ·结果分析 | 第87-90页 |
| ·Be WRKY1 和Be WRKY2 RNA i目的片段的扩增 | 第87页 |
| ·植物表达载体pCAMBIA - WRKY - RNA i的构建 | 第87-90页 |
| ·结论与讨论 | 第90-91页 |
| 7 慈竹pCAMBIA - Be WRKY1 和pCAMBIA - Be WRKY 2 质粒转化烟草 | 第91-107页 |
| ·试验材料和仪器 | 第91-92页 |
| ·试验材料及试剂 | 第91-92页 |
| ·试验工具与仪器 | 第92页 |
| ·实验步骤 | 第92-99页 |
| ·烟草无菌苗的培育 | 第92页 |
| ·pCAMBIA – Be WRKY1/Be WRKY 2和pCAMBIA– Be WRKY1/Be WRKY2-RNAi质粒转化农杆菌 | 第92-94页 |
| ·叶盘法转化烟草 | 第94-95页 |
| ·抗性苗的分化与生根筛选 | 第95-96页 |
| ·转基因烟草植物的验证 | 第96-97页 |
| ·转基因烟草植株半定量RT - PCR | 第97-98页 |
| ·烟草光合作用测定 | 第98-99页 |
| ·试验结果分析 | 第99-106页 |
| ·Be WRKY1 过表达转基因烟草的抗性植株的获得以及阳性苗的验证 | 第99-101页 |
| ·Be WRKY1 和Be WRKY 2 转基因植株的半定量检测 | 第101-103页 |
| ·转基因烟草与对照光合作用分析结果 | 第103-106页 |
| ·结论 | 第106-107页 |
| 8 结论 | 第107-109页 |
| 致谢 | 第109-110页 |
| 参考文献 | 第110-119页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文及研究成果 | 第119页 |
