| 摘要 | 第1-16页 |
| Abstract | 第16-18页 |
| 第一章 引言 | 第18-32页 |
| 1 文献综述 | 第18-29页 |
| ·土壤盐渍化及其危害植物的作用机理 | 第18-20页 |
| ·土壤盐渍化 | 第18-19页 |
| ·土壤盐渍化危害植物生长的作用机理 | 第19-20页 |
| ·植物的耐盐机制 | 第20-25页 |
| ·植物的耐盐性及耐盐机制的种类 | 第20-21页 |
| ·植物形态上的适应性 | 第21-22页 |
| ·渗透调节 | 第22页 |
| ·拒盐和离子区隔化 | 第22-23页 |
| ·活性氧清除机制 | 第23-24页 |
| ·植物盐胁迫信号转导 | 第24-25页 |
| ·大麦耐盐性的研究进展 | 第25-26页 |
| ·生物信息学在发现抗逆相关基因中的应用 | 第26页 |
| ·基因功能分析专用载体简介 | 第26-29页 |
| ·绿色荧光蛋白简介 | 第26-27页 |
| ·Ubiquitin启动子简介 | 第27-28页 |
| ·NPTII基因简介 | 第28页 |
| ·pUCm-T克隆载体简介 | 第28-29页 |
| 2 本文研究的内容 | 第29-30页 |
| 3 本试验的研究意义 | 第30-32页 |
| 第二章 大麦盐诱导根系表达基因HvSR1的鉴定 | 第32-45页 |
| 1 材料 | 第32-35页 |
| ·试验材料 | 第32-33页 |
| ·试验植物 | 第32页 |
| ·生物信息学软件 | 第32页 |
| ·PCR引物 | 第32-33页 |
| ·主要药品与试剂的配置 | 第33-34页 |
| ·药品 | 第33页 |
| ·主要试剂的配置 | 第33-34页 |
| ·主要仪器和设备 | 第34-35页 |
| 2 试验方法 | 第35-38页 |
| ·大麦的种植方法 | 第35页 |
| ·生物信息学筛选目的基因 | 第35页 |
| ·大麦幼苗根部盐处理试验 | 第35-36页 |
| ·大麦各个组织器官取材试验 | 第36页 |
| ·大麦各个组织器官及盐处理植株幼根RNA的提取及cDNA的制备 | 第36-37页 |
| ·大麦各个组织器官及盐处理植株幼根RNA的提取 | 第36页 |
| ·大麦cDNA的制备 | 第36-37页 |
| ·检测反转录产物 | 第37页 |
| ·用特异性引物扩增cDNA验证目的基因的表达模式 | 第37-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-43页 |
| ·生物信息学筛选根部特异性盐诱导基因 | 第38-40页 |
| ·利用Genevestigator数据库初步筛选目的基因 | 第38-39页 |
| ·基因CDS序列的获得 | 第39-40页 |
| ·RT-PCR验证基因HvSR1在各个组织器官中的表达量模式 | 第40页 |
| ·RT-PCR验证盐胁迫下基因HvSR1在根部的表达模式 | 第40页 |
| ·HvSR1基因的序列分析 | 第40-43页 |
| 4 讨论 | 第43-45页 |
| 第三章 用于单子叶植物转化的绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-UN的构建 | 第45-62页 |
| 1 材料 | 第45-48页 |
| ·试验材料 | 第45页 |
| ·生物信息学软件 | 第45页 |
| ·PCR引物 | 第45页 |
| ·质粒和菌种 | 第45页 |
| ·主要药品与试剂的配制 | 第45-48页 |
| ·主要药品 | 第45-46页 |
| ·主要试剂的配置 | 第46-47页 |
| ·主要仪器和设备 | 第47-48页 |
| 2 试验方法 | 第48-54页 |
| ·质粒的活化 | 第48-49页 |
| ·pEASY-ubi-npt II质粒的提取 | 第49页 |
| ·PCR扩增目的片段ubi-npt II | 第49-50页 |
| ·目的片段Ubi-npt II的回收 | 第50页 |
| ·回收目的片段的加A反应 | 第50-51页 |
| ·加A产物与克隆载体pUCm-T的连接 | 第51页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞DH5α的制备 | 第51-52页 |
| ·连接产物的热激转化 | 第52页 |
| ·菌落PCR筛选阳性转化菌株 | 第52-53页 |
| ·所筛选产物的测序 | 第53页 |
| ·重组质粒pUCm-T-Ubi-NPTII与pEGFP质粒的提取 | 第53页 |
| ·重组质粒和pEGFP载体的双酶切及回收 | 第53-54页 |
| ·酶切后pEGFP载体与目的片段的连接与转化 | 第54页 |
| ·重组质粒pEGFP-UN的测序鉴定与保存 | 第54页 |
| 3 结果与分析 | 第54-60页 |
| ·对目的片段Ubi-npt II的扩增与回收 | 第54-56页 |
| ·目的片段的扩增 | 第54-55页 |
| ·目的片段的胶回收 | 第55-56页 |
| ·目的片段ubi-npt II与克隆载体pUCm-T的连接反应转化产物的鉴定与测序 | 第56-58页 |
| ·菌落PCR筛选鉴定阳性菌落 | 第56-57页 |
| ·菌落PCR筛选的阳性菌落的测序 | 第57-58页 |
| ·克隆载体pUCm-T-Ubi-NPTII与pEGFP质粒的提取、双酶切及回收 | 第58-59页 |
| ·克隆载体和pEGFP的提取和双酶切 | 第58页 |
| ·酶切片段的回收及检测 | 第58-59页 |
| ·双酶切回收产物的连接、转化与测序鉴定 | 第59-60页 |
| 4 讨论 | 第60-62页 |
| ·单子叶植物转基因体系的建立及现有的用于阳性植株筛选的主要载体资源 | 第60页 |
| ·载体pEGFP-UN的优点 | 第60-61页 |
| ·实验过程中的问题及解决 | 第61-62页 |
| 第四章 禾谷类作物T-DNA插入突变体库专用载体pBA9N的构建 | 第62-74页 |
| 1 材料 | 第62-65页 |
| ·试验材料 | 第62页 |
| ·生物信息学软件 | 第62页 |
| ·PCR引物 | 第62页 |
| ·质粒和菌种 | 第62页 |
| ·主要药品与试剂的配制 | 第62-64页 |
| ·主要药品 | 第62-63页 |
| ·主要试剂的配制 | 第63-64页 |
| ·主要仪器和设备 | 第64-65页 |
| 2 试验方法 | 第65-69页 |
| ·目的片段的获得 | 第65-67页 |
| ·pBract806、pDONR(amp)、pEASY-ubi-npt II质粒的活化 | 第65页 |
| ·pBract806、pDONR(amp)、pEASY-ubi-npt II质粒的提取 | 第65-66页 |
| ·PCR扩增目的片段 | 第66-67页 |
| ·目的片段NptⅡ-attB的回收 | 第67页 |
| ·入门载体的构建 | 第67-68页 |
| ·BP反应 | 第67-68页 |
| ·入门载体转化大肠杆菌细胞 | 第68页 |
| ·入门载体的菌落PCR鉴定 | 第68页 |
| ·表达载体的构建 | 第68-69页 |
| ·LR反应 | 第68-69页 |
| ·表达载体转化大肠杆菌细胞 | 第69页 |
| ·表达载体的菌落PCR鉴定 | 第69页 |
| 3 结果与分析 | 第69-73页 |
| ·目的片段NptⅡ-attB的扩增 | 第69-70页 |
| ·入门载体pDONRN的构建 | 第70-71页 |
| ·表达载体pBA9N的构建 | 第71-73页 |
| 4 讨论 | 第73-74页 |
| 第五章 结论 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第83页 |
