| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-26页 |
| ·绿豆概况 | 第11-14页 |
| ·绿豆的药用价值研究 | 第11-12页 |
| ·绿豆种质资源的研究进展 | 第12-13页 |
| ·绿豆基因克隆研究现状 | 第13-14页 |
| ·查尔酮异构酶研究进展 | 第14-18页 |
| ·查尔酮异构酶的类型特点及催化过程 | 第14-15页 |
| ·查尔酮异构酶基因研究进展 | 第15-17页 |
| ·查尔酮异构酶基因在基因工程中的应用 | 第17-18页 |
| ·查尔酮合成酶研究进展 | 第18-22页 |
| ·查尔酮合成酶的结构及催化机制 | 第18-19页 |
| ·查尔酮合成酶基因研究进展 | 第19-21页 |
| ·查尔酮合成酶基因的功能及应用 | 第21-22页 |
| ·获得目的基因的常用方法概述 | 第22-23页 |
| ·转基因大豆研究方法概述 | 第23-25页 |
| ·本实验研究目的与意义 | 第25-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-35页 |
| ·材料 | 第26-27页 |
| ·植物材料 | 第26页 |
| ·菌株及质粒 | 第26页 |
| ·药品 | 第26页 |
| ·培养基 | 第26-27页 |
| ·主要仪器设备 | 第27页 |
| ·方法 | 第27-35页 |
| ·绿豆叶片cDNA第一链的获得 | 第27页 |
| ·绿豆查尔酮异构酶基因的克隆 | 第27-29页 |
| ·绿豆CHI基因片段的克隆 | 第27-28页 |
| ·绿豆CHI基因片段的回收、连接及转化 | 第28-29页 |
| ·绿豆CHI基因的拼接及验证 | 第29页 |
| ·绿豆查尔酮合成酶基因的克隆 | 第29-30页 |
| ·绿豆CHS的获得 | 第29-30页 |
| ·绿豆CH8基因的回收、连接、转化及测序 | 第30页 |
| ·绿豆CHS基因的验证 | 第30页 |
| ·植物表达载体pFGC5941-CHI的构建及农杆菌转化 | 第30-33页 |
| ·农杆菌介导法转基因烟草阳性植株的获得及分子检测 | 第33-34页 |
| ·农杆菌介导转化大豆及阳性植株的分子检测 | 第34-35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-59页 |
| ·绿豆查尔酮异构酶基因的克隆 | 第35-42页 |
| ·绿豆RNA的提取与检测 | 第35页 |
| ·绿豆CHI基因片段的获得 | 第35-36页 |
| ·绿豆CHI基因片段的测序结果分析 | 第36-37页 |
| ·绿豆CHI基因的拼接结果与验证 | 第37页 |
| ·绿豆CHI基因的获得与生物信息学分析 | 第37-42页 |
| ·绿豆查尔酮合成酶基因的克隆 | 第42-50页 |
| ·绿豆CHS基因的获得 | 第42-43页 |
| ·绿豆CHS基因的验证 | 第43-44页 |
| ·绿豆CHS基因的生物信息学分析 | 第44-50页 |
| ·植物表达载体的构建及农杆菌转化 | 第50-52页 |
| ·植物表达载体pFGC5941-CHI的构建 | 第50-51页 |
| ·重组载体农杆菌转化及验证 | 第51-52页 |
| ·叶盘法转化烟草 | 第52-55页 |
| ·重组载体的烟草遗传转化过程 | 第52-53页 |
| ·转基因烟草阳性植株分子检测 | 第53-55页 |
| ·转基因烟草PCR检测 | 第53页 |
| ·转基因烟草阳性植株的RT-PCR检测 | 第53-54页 |
| ·转基因烟草阳性植株的总黄酮含量检测 | 第54-55页 |
| ·农杆菌介导法转化大豆 | 第55-59页 |
| ·种胚侵染转化法转化大豆 | 第55页 |
| ·转基因大豆阳性植株的检测 | 第55-59页 |
| ·转基因大豆植株PCR检测 | 第55-56页 |
| ·转基因大豆阳性植株RT-PCR检测 | 第56-57页 |
| ·转基因大豆阳性植株的抗除草剂检测 | 第57页 |
| ·转基因大豆阳性植株叶片总黄酮含量检测 | 第57-59页 |
| 4 讨论 | 第59-63页 |
| ·绿豆查尔酮异构酶基因与查尔酮合成酶基因的克隆 | 第59-60页 |
| ·绿豆查尔酮异构酶基因转化烟草 | 第60-61页 |
| ·绿豆查尔酮异构酶基因转化大豆 | 第61页 |
| ·本文创新点 | 第61-63页 |
| 5 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-73页 |
| 附录Ⅰ 培养基配方 | 第73-74页 |
| 附录Ⅱ pFGC5941载体图谱 | 第74-75页 |
| 附录Ⅲ 绿豆查尔酮异构酶与查尔酮合成酶基因及氨基酸序列 | 第75-78页 |
| 附录Ⅳ 药品缩略词 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79页 |