| 摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-6页 |
| 第一章 绪论 | 第6-15页 |
| ·本题的来源及意义 | 第6-7页 |
| ·淀粉酶简介 | 第7页 |
| ·葡萄糖淀粉酶 | 第7-13页 |
| ·葡萄糖淀粉酶的最适温度和pH | 第8-9页 |
| ·葡萄糖淀粉酶的结构和催化机理 | 第9-11页 |
| ·葡萄糖淀粉酶基因的克隆和表达 | 第11-13页 |
| ·酿酒酵母外源表达系统 | 第13-15页 |
| ·酿酒酵母简介 | 第13页 |
| ·酿酒酵母表达系统优点 | 第13-14页 |
| ·酿酒酵母表达系统载体 | 第14-15页 |
| 第二章 材料和方法 | 第15-29页 |
| ·主要材料 | 第15-17页 |
| ·试剂及仪器 | 第15-16页 |
| ·菌株及质粒 | 第16-17页 |
| ·实验方法 | 第17-29页 |
| ·培养基与溶液配制 | 第17-18页 |
| ·菌株的培养 | 第18页 |
| ·目的基因的提取 | 第18-22页 |
| ·目的基因连接与转化 | 第22-24页 |
| ·质粒提取与酶切 | 第24-25页 |
| ·葡萄糖淀粉酶纯化 | 第25页 |
| ·诱导表达目的蛋白 | 第25-26页 |
| ·蛋白质SDS-PAGE电泳 | 第26-27页 |
| ·葡萄糖淀粉酶酶活测定 | 第27-28页 |
| ·重组质粒pRS416-sta1在酿酒酵母中的稳定性 | 第28-29页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第29-47页 |
| ·STA1基因的提取与鉴定 | 第29-36页 |
| ·提取糖化酵母全基因组 | 第29-30页 |
| ·STA1基因PCR引物与条件设计 | 第30-34页 |
| ·重组克隆质粒pUM-T-sta1测序 | 第34-36页 |
| ·pRS416-stal重组表达质粒的构建及鉴定 | 第36-38页 |
| ·pRS416-stal重组表达质粒的构建 | 第36-38页 |
| ·pRS416-stal质粒鉴定 | 第38页 |
| ·重组表达产物糖化酶的SDS-PAGE鉴定 | 第38-40页 |
| ·葡萄糖淀粉酶酶活测定 | 第40-45页 |
| ·酿酒酵母中葡萄糖淀粉酶的表达检测 | 第40页 |
| ·葡萄糖淀粉酶最适温度与pH | 第40-44页 |
| ·葡萄糖淀粉酶稳定性 | 第44-45页 |
| ·重组质粒在酿酒酵母中稳定性 | 第45页 |
| ·讨论与展望 | 第45-47页 |
| 第四章 结论 | 第47-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-55页 |
| 作者简介 | 第55页 |
| 攻读硕士学位期间研究成果 | 第55-56页 |