| 摘要 | 第1-9页 |
| 前言 | 第9-10页 |
| 文献综述 | 第10-18页 |
| 1 黑色素细胞的发育与生理功能 | 第10-13页 |
| ·黑色素细胞的发育过程 | 第10-11页 |
| ·黑色素的合成 | 第11页 |
| ·与黑色素形成与转运有关的信号传导途径 | 第11-13页 |
| ·DAG/PKC信号通路 | 第12页 |
| ·NO/cGMP/PKG信号通路 | 第12页 |
| ·cAMP/PKA信号通路 | 第12页 |
| ·MAPK级联途径 | 第12-13页 |
| ·调控色素形成的主效基因 | 第13页 |
| 2 有关miRNAs的研究现状及其在毛色形成中的作用 | 第13-16页 |
| ·miRNA的发现过程 | 第13页 |
| ·miRNA生物发生机制 | 第13-15页 |
| ·miRNA的研究进展 | 第15-16页 |
| 3 α-MSH的研究现状及其在毛色形成中的作用 | 第16-17页 |
| ·α-MSH的生物发生机制 | 第16页 |
| ·α-MSH与黑色素细胞增殖的关系 | 第16页 |
| ·α-MSH的研究进展 | 第16-17页 |
| 4 本实验的研究意义和解决的问题 | 第17-18页 |
| 材料和方法 | 第18-29页 |
| 1 实验材料 | 第18-21页 |
| ·实验样本 | 第18页 |
| ·实验所用仪器 | 第18页 |
| ·细胞培养用品 | 第18-19页 |
| ·构建1pa-miR-nov-66过表达载体所需试剂 | 第19页 |
| ·总RNA的提取、RT-PCR、qRT-PCR所需试剂及耗材 | 第19页 |
| ·总蛋白提取和免疫蛋白印迹实验所用试剂 | 第19-21页 |
| ·总蛋白提取所用试剂 | 第19页 |
| ·免疫蛋白印迹实验所用试剂及耗材 | 第19-21页 |
| ·elisa、黑色素提取、细胞增殖实验所需试剂 | 第21页 |
| 2 实验方法 | 第21-29页 |
| ·细胞培养 | 第21-22页 |
| ·羊驼表皮黑色素细胞的复苏 | 第21页 |
| ·羊驼皮肤3代皮肤黑色素细胞的传代培养 | 第21页 |
| ·黑色素细胞的冻存 | 第21-22页 |
| ·lpa-miR-nov-66过表达载体质粒的构建 | 第22-23页 |
| ·OligoDNA的设计与合成 | 第22页 |
| ·过表达载体的构建 | 第22页 |
| ·1pa-miR-nov-66过表达载体的提取 | 第22-23页 |
| ·1pa-miR-nov-66过表达载体的转染及添加a-MSH | 第23-24页 |
| ·羊驼黑色素细胞总RNA、RT-PCR、QRT-PCR | 第24-26页 |
| ·羊驼黑色素细胞总RNA的提取 | 第24页 |
| ·cDNA的合成 | 第24页 |
| ·引物设计 | 第24-25页 |
| ·四组细胞Real-time RT-PCR体系的建立 | 第25页 |
| ·RT-PCR体系扩增条件 | 第25页 |
| ·数据处理与分析 | 第25-26页 |
| ·羊驼黑色素细胞的蛋白免疫印迹 | 第26-27页 |
| ·细胞总蛋白质的提取 | 第26页 |
| ·蛋白样品制备 | 第26页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第26-27页 |
| ·转膜及抗体孵育 | 第27页 |
| ·羊驼黑色素细胞黑色素的提取和测定 | 第27页 |
| ·cAMP和cGMP含量的测定 | 第27-28页 |
| ·细胞增殖实验 | 第28-29页 |
| 实验结果 | 第29-34页 |
| ·α-MSH和1pa-miR-nov-66对羊驼黑色素细胞内1pa-miR-nov-66、MITF、TYR和TYRP2在转录水平的表达分析 | 第29-30页 |
| ·四组羊驼黑色素细胞总RNA的质量检测 | 第29页 |
| ·添加α-MSH后羊驼黑色素细胞内1pa-miR-nov-66表达水平的变化 | 第29-30页 |
| ·转染1pa-miR-nov-66和添加a-MSH对羊驼黑色素细胞内MITF、TYR和TYRP2在转录水平的表达分析 | 第30页 |
| ·四组羊驼黑色素细胞内MITF、TYR和TYRP2在蛋白水平的表达分析 | 第30-31页 |
| ·α-MSH和1pa-miR-nov-66对黑色素产量的影响 | 第31-32页 |
| ·α-MSH和1pa-miR-nov-66对羊驼黑色素细胞内cGMP和cAMP水平的影响 | 第32-33页 |
| ·α-MSH和1pa-miR-nov-66对黑色素细胞增殖的影响 | 第33-34页 |
| 讨论 | 第34-37页 |
| ·简述影响动物毛色的因素 | 第34页 |
| ·miRNA在皮肤发育中的作用及1pa-miR-nov-66的研究进展 | 第34-35页 |
| ·α-MSH在黑色素细胞生长发育过程中的作用 | 第35页 |
| ·本实验的研究意义与展望 | 第35-37页 |
| 结论 | 第37-38页 |
| 参考文献 | 第38-44页 |
| Abstract | 第44-46页 |
| 致谢 | 第46页 |
