| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 符号说明 | 第13-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-35页 |
| 第一节 细胞内的钙离子信号转导 | 第14-16页 |
| ·细胞的信号转导 | 第14页 |
| ·细胞钙离子的信号转导 | 第14-16页 |
| 第二节 STIM1蛋白及其相关蛋白的介绍 | 第16-34页 |
| ·钙库操纵的钙离子内流(Store-operated calcium entry,SOCE) | 第16-18页 |
| ·STIM1与Orai1分子的发现 | 第18-20页 |
| ·CRAC通道的核心亚基Orai1 | 第20-21页 |
| ·STIM1：SOCE过程中的关键蛋白 | 第21-25页 |
| ·STIM1与Orai1的相互作用激活CRAC通道 | 第25-30页 |
| ·其它的CRAC蛋：STIM2、Orai2和Orai3 | 第30-32页 |
| ·线虫以及果蝇源的STIM1 | 第32-34页 |
| 第三节 STIM1的研究意义 | 第34-35页 |
| 第二章 材料与方法 | 第35-67页 |
| 第一节 实验材料 | 第35-46页 |
| ·目的基因 | 第35页 |
| ·质粒 | 第35-39页 |
| ·用于扩增与表达的大肠杆菌菌株 | 第39-40页 |
| ·常用试剂、工具酶和耗材 | 第40-41页 |
| ·结晶初筛所用试剂盒和晶体优化所用试剂 | 第41-42页 |
| ·实验主要仪器 | 第42-43页 |
| ·常用试剂和溶液配制 | 第43-46页 |
| 第二节 实验方法 | 第46-67页 |
| ·基因克隆 | 第46-54页 |
| ·目的蛋白的表达与纯化 | 第54-59页 |
| ·蛋白质晶体生长 | 第59-63页 |
| ·超速离心沉降速率(Sendimentation Velocity)分析实验 | 第63页 |
| ·细胞的培养与转染 | 第63-64页 |
| ·蛋白质甲基化 | 第64页 |
| ·去污剂的作用原理及其筛选 | 第64-67页 |
| 第三章 线虫与果蝇源的STIM1蛋白不同结构域的纯化和晶体筛选 | 第67-111页 |
| 第一节 果蝇源STIM1蛋白C端全长(Dr-STIM1-C)以及其它片段的纯化和晶体筛选 | 第67-82页 |
| ·Dr-STIM1-C的分子克隆 | 第67-68页 |
| ·Dr-STIM1-C的小量表达 | 第68-71页 |
| ·Dr-STIM1-C的大量表达与纯化 | 第71-81页 |
| ·果蝇源STIM1蛋白C端其它片段的表达 | 第81-82页 |
| ·总结与分析 | 第82页 |
| 第二节 线虫源STIM1蛋白C端全长(Ce-STIM1-C)的纯化和晶体筛选 | 第82-90页 |
| ·Ce-STIM1-C的分子克隆 | 第82-83页 |
| ·Ce-STIM1-C的小量表达 | 第83-85页 |
| ·Ce-STIM1-C的大量表达与纯化 | 第85-89页 |
| ·总结与分析 | 第89-90页 |
| 第三节 线虫STIM1-C端的coiled-coil区域和SOAR区域的表达、纯化和晶体生长 | 第90-109页 |
| ·CeS-CC1片段的表达、纯化和晶体生长 | 第92-93页 |
| ·CeS-SOAR片段的表达、纯化和晶体生长 | 第93-102页 |
| ·CeS-CC1-SOAR片段的表达、纯化和晶体生长 | 第102-109页 |
| 第四节 总结与分析 | 第109-111页 |
| 第四章 线虫STIM1的C端片段Ce-STIM1-CCR的表达、纯化、晶体生长和结构的解析 | 第111-122页 |
| 第一节 Ce-STIM1-CCR的表达、纯化和晶体生长 | 第111-119页 |
| ·Ce-STIM1-CCR片段的选择 | 第111-112页 |
| ·Ce-STIM1-CCR片段的小量表达测试 | 第112页 |
| ·Ce-STIM1-CCR片段的纯化与晶体初筛 | 第112-117页 |
| ·Ce-STIM1-CCR片段品体的优化 | 第117-119页 |
| ·Ce-STIM1-CCR硒代衍生物的表达纯化与晶体的生长 | 第119页 |
| 第二节 Ce-STIM1-CCR数据收集和结构的解析 | 第119-122页 |
| ·Ce-STIM1-CCR数据收集 | 第119-120页 |
| ·Ce-STIM1-CCR的结构解析 | 第120-122页 |
| 第五章 Ce-STIM1-CCR结构分析以及基于其结构所设计的功能研究实验 | 第122-133页 |
| 第一节 人源STIM1的SOAR结构域hsSOAR结构简介 | 第122-123页 |
| 第二节 Ce-STIM1-CCR结构的分析 | 第123-126页 |
| ·Ce-STIM1-CCR与hsSOAR结构的比较 | 第123-125页 |
| ·Ce-STIM1-CCR的αA螺旋 | 第125-126页 |
| 第三节 基于Ce-STIM1-CCR的结构信息所设计的功能研究实验 | 第126-133页 |
| ·线虫STIM1与人源STIM1具有相似的功能 | 第126-129页 |
| ·对于1H的功能研究 | 第129-133页 |
| 第六章 结论 | 第133-135页 |
| 第七章 线粒体钙离子信号通路蛋白MCUR1的纯化和晶体筛选 | 第135-150页 |
| 第一节 引言 | 第135-140页 |
| ·线粒体钙离子的摄取和释放 | 第135-136页 |
| ·内质网线粒体连接区域 | 第136-137页 |
| ·线粒体的钙离子缓冲作用在细胞内的意义 | 第137-139页 |
| ·MCU及其相关蛋白 | 第139-140页 |
| ·MCUR1的发现 | 第140页 |
| ·MCUR1的研究意义 | 第140页 |
| 第二节 MCUR1的表达、纯化与晶体筛选 | 第140-149页 |
| ·MCUR1的分子克隆 | 第142页 |
| ·MCUR1的小量表达测试 | 第142-143页 |
| ·MCUR1蛋白的纯化与晶体的筛选 | 第143-149页 |
| 第三节 总结 | 第149-150页 |
| 参考文献 | 第150-158页 |
| 致谢 | 第158-159页 |
| 个人简历 | 第159页 |
