| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-12页 |
| CONTENTS | 第12-16页 |
| 图表目录 | 第16-19页 |
| 引言 | 第19-20页 |
| 1 文献综述 | 第20-41页 |
| ·聚酮化合物及聚酮合酶 | 第20-27页 |
| ·聚酮化合物 | 第20-21页 |
| ·聚酮合酶的类型及基因结构 | 第21-24页 |
| ·聚酮合酶的作用机理 | 第24-26页 |
| ·组合生物合成在聚酮合酶改造中的应用 | 第26-27页 |
| ·聚酮化合物的PKS后修饰 | 第27-31页 |
| ·PKS后修饰简介 | 第27页 |
| ·PKS后修饰酶 | 第27-31页 |
| ·聚酮化合物PKS后修饰基因功能的研究方法 | 第31-36页 |
| ·链霉菌基因敲除和基因替换 | 第31-35页 |
| ·链霉菌遗传转化的方法 | 第35-36页 |
| ·FST的研究进展 | 第36-40页 |
| ·FST简介 | 第36-37页 |
| ·FST的生物学活性 | 第37-38页 |
| ·FST的临床研究 | 第38页 |
| ·FST的化学全合成简介 | 第38-39页 |
| ·FST的生物合成机制 | 第39-40页 |
| ·本文主要研究内容与思路 | 第40-41页 |
| 2 FST产生菌遗传转化体系的建立与优化 | 第41-61页 |
| ·引言 | 第41-42页 |
| ·实验材料与设备 | 第42-46页 |
| ·实验材料 | 第42页 |
| ·实验试剂 | 第42-43页 |
| ·实验设备 | 第43页 |
| ·培养基与试剂配制 | 第43-46页 |
| ·实验方法 | 第46-51页 |
| ·菌株培养方法 | 第46页 |
| ·碱裂解法提取质粒 | 第46页 |
| ·链霉菌基因组DNA提取 | 第46-47页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第47页 |
| ·质粒转化 | 第47-48页 |
| ·绿色荧光蛋白GFP表达载体的构建 | 第48-49页 |
| ·大肠杆菌-链霉菌之间接合转移 | 第49-50页 |
| ·pSET152转化子的鉴定方法 | 第50-51页 |
| ·实验结果 | 第51-58页 |
| ·pSET152转化子的遗传稳定性及PCR鉴定 | 第51-52页 |
| ·培养基对接合转移效率的影响 | 第52页 |
| ·热激温度对接合转移效率的影响 | 第52-53页 |
| ·抗生素覆盖时间对接合转移效率的影响 | 第53-54页 |
| ·抗生素覆盖浓度对接合转移效率的影响 | 第54-55页 |
| ·甘氨酸浓度对接合转移效率的影响 | 第55页 |
| ·绿色荧光蛋白GFP在链霉菌中的表达 | 第55-58页 |
| ·讨论 | 第58-60页 |
| ·小结 | 第60-61页 |
| 3 FST PKS后修饰基因置换载体的构建 | 第61-81页 |
| ·引言 | 第61-62页 |
| ·实验材料与设备 | 第62-64页 |
| ·实验材料 | 第62页 |
| ·实验试剂 | 第62-63页 |
| ·实验设备 | 第63页 |
| ·培养基与试剂配制 | 第63-64页 |
| ·实验方法 | 第64-69页 |
| ·质粒提取 | 第64-65页 |
| ·引物设计 | 第65页 |
| ·DNA片段纯化回收 | 第65-66页 |
| ·PCR扩增带有oriT的阿伯拉霉素基因抗性盒 | 第66-67页 |
| ·电转感受态细胞的制备 | 第67页 |
| ·电转杯的处理方法 | 第67-68页 |
| ·PCR产物的电转化 | 第68页 |
| ·同源重组质粒的鉴定方法 | 第68-69页 |
| ·实验结果 | 第69-79页 |
| ·Red重组系统电转体系的优化 | 第69-72页 |
| ·FST后修饰基因的序列分析 | 第72页 |
| ·带oriT位点的阿伯拉霉素基因抗性盒的扩增 | 第72-74页 |
| ·PCR鉴定FST后修饰基因置换载体 | 第74-79页 |
| ·讨论 | 第79-80页 |
| ·小结 | 第80-81页 |
| 4 FST PKS后修饰基因功能及其生物合成机制 | 第81-116页 |
| ·引言 | 第81-82页 |
| ·实验材料与设备 | 第82-84页 |
| ·实验材料 | 第82页 |
| ·实验设备 | 第82-83页 |
| ·实验试剂 | 第83-84页 |
| ·培养基与试剂配制 | 第84页 |
| ·实验方法 | 第84-89页 |
| ·大肠杆菌ET12567/pUZ8002感受态细胞的制备 | 第84页 |
| ·后修饰基因置换载体转入大肠杆菌ET12567/pUZ8002 | 第84页 |
| ·后修饰基因置换载体导入链霉菌S.pulveraceus | 第84-85页 |
| ·接合转移子基因组DNA的提取 | 第85页 |
| ·基因敲除转化子的鉴定方法 | 第85-86页 |
| ·后修饰基因回复载体的构建 | 第86-88页 |
| ·野生型、突变菌株及回复菌株的发酵 | 第88页 |
| ·次级代谢产物的HPLC分析 | 第88页 |
| ·FST及其类似物的分离纯化 | 第88-89页 |
| ·FST及其类似物的结构鉴定 | 第89页 |
| ·实验结果 | 第89-111页 |
| ·fosJ基因功能分析 | 第89-94页 |
| ·fosG基因功能分析 | 第94-98页 |
| ·fosK基因功能分析 | 第98-101页 |
| ·fosH基因功能分析 | 第101-105页 |
| ·fosM基因功能分析 | 第105-110页 |
| ·FST后修饰途径分析 | 第110-111页 |
| ·讨论 | 第111-115页 |
| ·小结 | 第115-116页 |
| 5 结论与展望 | 第116-118页 |
| ·结论 | 第116-117页 |
| ·创新点摘要 | 第117页 |
| ·展望 | 第117-118页 |
| 参考文献 | 第118-129页 |
| 附录 | 第129-132页 |
| 附录A 缩略词表 | 第129-130页 |
| 附录B 载体构建图 | 第130-132页 |
| 攻读博士学位期间发表学术论文情况 | 第132-133页 |
| 致谢 | 第133-134页 |
| 作者简介 | 第134-135页 |
