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辣椒素生物合成途径基因的表达分析及遗传转化研究

摘要第1-7页
Abstract第7-15页
第1章 引言第15-25页
   ·辣椒素的生物学功能第15-17页
     ·辣椒素的抗癌机理第16页
     ·辣椒素的降脂机理第16-17页
     ·辣椒素的抗菌作用第17页
     ·辣椒素的其他作用第17页
   ·辣椒素的代谢网络第17-20页
     ·辣椒素的合成代谢第17-18页
     ·辣椒素的分解代谢第18-20页
   ·辣椒素生物合成途径相关基因的研究第20-22页
   ·油菜素内酯的生物学功能第22-23页
   ·辣椒遗传转化方法第23页
   ·本研究的目的和意义第23-25页
第2章 材料与方法第25-69页
   ·材料第25-29页
     ·植物材料第25页
     ·菌种与载体第25-28页
     ·药品试剂第28-29页
     ·仪器第29页
   ·方法第29-69页
     ·试剂与培养基的配制第29-30页
     ·辣椒总DNA 的提取第30-31页
     ·辣椒RNA 的提取与cDNA 第一链的合成第31-32页
     ·目的基因的回收与连接第32-34页
     ·感受态细胞的制备及转化第34-35页
     ·质粒的提取方法第35-36页
     ·重组质粒的菌液PCR 及酶切鉴定第36页
     ·目的基因的生物信息学分析第36-37页
     ·半定量RT-PCR 分析第37-38页
     ·Real time RT-PCR 分析第38页
     ·亚细胞定位第38-39页
     ·原核表达第39-42页
     ·苯丙氨酸裂解酶基因Pal 的克隆与原核表达第42-47页
     ·3-氧酰基[酰基载体蛋白]还原酶基因Kas 的克隆及表达第47-50页
     ·氨基转移酶基因pAMT 和硫酯酶A 基因FatA 的克隆及序列分析第50-52页
     ·酰基转移酶基因Pun1 的克隆及表达第52-59页
     ·辣椒素生物合成途径相关基因的时空表达差异研究第59-60页
     ·油菜素内酯对辣椒素生物合成途径基因的表达调控的研究第60页
     ·基因Pun1 的遗传转化第60-69页
第3章 结果与分析第69-129页
   ·苯丙氨酸裂解酶基因Pal 的克隆及原核表达分析第69-77页
     ·辣椒总RNA 的提取与cDNA 第一链的合成第69-70页
     ·Pal 基因的克隆第70-71页
     ·Pal 基因的序列分析第71-73页
     ·Pal 基因原核表达分析第73-77页
   ·3-氧酰基[酰基载体蛋白]还原酶基因Kas 的克隆及表达分析第77-86页
     ·辣椒总DNA、RNA 的提取与cDNA 第一链的合成第77-79页
     ·Kas 基因的克隆第79-80页
     ·Kas 基因的序列分析第80-84页
     ·Kas 基因的RT-PCR 时空表达分析第84-85页
     ·油菜素内酯对Kas 基因调控的Real-time RT-PCR 分析第85-86页
   ·氨基转移酶基因pAMT 和硫酯酶A 基因FatA 的克隆及序列分析第86-94页
     ·辣椒总RNA 的提取与cDNA 第一链的合成第86-87页
     ·pAMT 与FatA 基因的克隆第87-90页
     ·pAMT 与FatA 基因的序列分析第90-94页
   ·酰基转移酶基因Pu111 的克隆及表达分析第94-109页
     ·辣椒总RNA 的提取与cDNA 第一链的合成第94-96页
     ·Pun1 基因克隆第96-97页
     ·Pun1 序列分析第97-99页
     ·Pun1 基因在烟草中的瞬时表达分析第99-103页
     ·Pun1 基因的原核表达分析第103-107页
     ·原核表达蛋白Pun1 的Western Blot 分析第107-108页
     ·Pun1 基因时空表达的RT-PCR 分析第108-109页
   ·辣椒素生物合成途径相关基因的时空表达分析第109-113页
     ·不同时间辣椒总RNA 提取与cDNA 第一链的合成第109-110页
     ·溶解曲线与扩增曲线分析第110-111页
     ·不同时期辣椒素生物合成相关基因的Real-time RT-PCR 分析第111-113页
   ·油菜素内酯对辣椒素生物合成途径基因的表达调控研究第113-117页
     ·不同时间辣椒总RNA 提取与cDNA 第一链的合成第113-114页
     ·油菜素内酯对辣椒素生物合成相关基因调控的Real-time RT-PCR 分析第114-117页
   ·辣椒遗传转化研究第117-129页
     ·pBI-2A-Pun1 植物表达载体构建第117-124页
     ·辣椒子叶节不同部位分化率研究第124-125页
     ·辣椒苗龄对子叶外殖体分化的影响第125-126页
     ·侵染时间的优化第126页
     ·转基因过程第126-127页
     ·转基因植株的PCR 鉴定第127-129页
第4章 讨论第129-133页
第5章 全文结论第133-134页
参考文献第134-143页
作者简介及科研成果第143-144页
致谢第144页

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