| 中文摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-14页 |
| 英文缩略词 | 第14-17页 |
| 前言 | 第17-20页 |
| 材料与方法 | 第20-35页 |
| 结果 | 第35-99页 |
| 第一部分 外源基因在E1区表达的复制型腺病毒载体的构建 | 第35-68页 |
| 1 重组腺病毒Ad5E1 A~+(IE3)的构建及复制能力检测 | 第35-50页 |
| ·pBHGlox(delta)E1,3Cre质粒酶切位点改造 | 第36-39页 |
| ·PGK-E1A表达盒的构建 | 第39-43页 |
| ·PGK-E1A表达盒插入到E3缺失区的重组质粒pBHG2-E1A的构建 | 第43页 |
| ·重组腺病毒Ad5E1A~+(IE3)的拯救和鉴定 | 第43-47页 |
| ·重组腺病毒Ad5E1A~+(IE3)复制能力的检测 | 第47-50页 |
| 2 重组腺病毒Ad5E1~+(IE3)的构建及复制能力检测 | 第50-62页 |
| ·PGK-E1表达盒的构建 | 第50页 |
| ·HeLa-E1细胞株的获得 | 第50-53页 |
| ·HeLa-E1细胞株对非复制型腺病毒复制的支持 | 第53-54页 |
| ·PGK-E1表达盒插入到E3缺失区的重组质粒pBHG2-E1的构建 | 第54页 |
| ·重组腺病毒Ad5E1~+(IE3)的拯救和鉴定 | 第54-57页 |
| ·重组腺病毒Ad5E1~+(IE3)复制能力的检测 | 第57-62页 |
| 3 重组腺病毒Ad5E1~+(1E1)的构建及复制能力检测 | 第62-67页 |
| ·穿梭质粒pDC316-E1-RFP的构建 | 第62页 |
| ·重组腺病毒Ad5E1~+(IE1)的拯救和鉴定 | 第62-65页 |
| ·重组腺病毒Ad5E1~+(IE1)复制能力的检测 | 第65-67页 |
| 本章小结 | 第67-68页 |
| 第二部分 基于Ⅳa2基因缺失的新型复制缺陷型腺病毒载体的构建 | 第68-94页 |
| 1 利用λ-RED重组酶系统改造腺病毒基因组方法的建立 | 第69-80页 |
| ·利用λ-RED重组酶系统改造腺病毒基因组的可行性探索 | 第69页 |
| ·通用型的PCR模板质粒pAK的构建 | 第69-71页 |
| ·利用λ-RED重组酶系统缺失腺病毒感染性克隆pFG140上的Ⅳa2基因 | 第71-74页 |
| ·利用λ-RED重组酶系统在Ⅳa2基因3’非编码区插入miRNA122的靶序列 | 第74-80页 |
| 2 腺病毒Ⅳa2 基因的缺失对腺病毒复制能力的影响 | 第80-86页 |
| ·Ⅳa2基因真核表达质粒pAAV2neo-Ⅳa2的构建和表达 | 第80-81页 |
| ·Ⅳa2基因缺失的重组腺病毒Ad5ΔⅣa2(1104)的拯救 | 第81页 |
| ·重组病毒Ad5ΔⅣa2(1104)的鉴定 | 第81-84页 |
| ·重组腺病毒Ad5ΔⅣa2(1104)的复制能力检测 | 第84-86页 |
| 3 新型复制缺陷型腺病毒载体的构建 | 第86-93页 |
| ·通过λ-RED介导的同源重组缺失pBHG2中的Ⅳa2基因 | 第86-87页 |
| ·腺病毒完整E1区插入到E1缺失区同时Ⅳa2基因缺失的重组腺病毒Ad5E1~+(IE1)ΔⅣa2(1104)的拯救和鉴定 | 第87-91页 |
| ·重组腺病毒Ad5E1~+(IE1)ΔⅣa2(1104)复制能力的检测 | 第91-93页 |
| 本章小结 | 第93-94页 |
| 第三部分 表达腺病毒Ⅳa2基因的细胞系的建立 | 第94-99页 |
| 1 表达腺病毒Ⅳa2基因重组质粒的构建与鉴定 | 第94页 |
| 2 转化细胞选择表达Ⅳa2 的细胞系 | 第94-96页 |
| 3 293 -Ⅳa2细胞株4#克隆稳定性检测 | 第96-97页 |
| 4 Ad5E1~+(IE1)ΔⅣa2(1104 )在293-Ⅳa2细胞株4 #克隆中的复制 | 第97-98页 |
| 本章小结 | 第98-99页 |
| 讨论 | 第99-108页 |
| 全文总结 | 第108-110页 |
| 参考文献 | 第110-114页 |
| 综述 | 第114-128页 |
| 参考文献 | 第124-128页 |
| 致谢 | 第128-129页 |
| 个人简历 | 第129页 |
