| 致谢 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| 1 文献综述 | 第9-22页 |
| ·漆酶的特性 | 第9-12页 |
| ·结构特征 | 第9-10页 |
| ·漆酶的化学组成 | 第10-11页 |
| ·漆酶的理化性质 | 第11-12页 |
| ·漆酶反应机理 | 第12-13页 |
| ·漆酶作用底物 | 第12页 |
| ·催化反应机理 | 第12-13页 |
| ·漆酶基因结构分析 | 第13页 |
| ·漆酶基因的克隆及表达 | 第13-15页 |
| ·大肠杆菌PET 表达系统 | 第15-16页 |
| ·细菌漆酶的功能 | 第16-17页 |
| ·细菌漆酶的研究现状 | 第17页 |
| ·漆酶的应用 | 第17-22页 |
| ·在有机合成方面的应用 | 第18页 |
| ·环境保护 | 第18-19页 |
| ·食品工业 | 第19页 |
| ·造纸工业 | 第19页 |
| ·生物检测 | 第19-20页 |
| ·其它方面 | 第20-22页 |
| 2 引言 | 第22-23页 |
| 3 材料和方法 | 第23-31页 |
| ·材料 | 第23页 |
| ·菌株和载体 | 第23页 |
| ·试剂和药品 | 第23页 |
| ·培养基 | 第23页 |
| ·仪器设备 | 第23页 |
| ·流程 | 第23-25页 |
| ·漆酶基因的克隆 | 第23-24页 |
| ·漆酶基因在大肠杆菌中的表达和纯化 | 第24-25页 |
| ·方法 | 第25-31页 |
| ·解淀粉芽孢杆菌 lac7 基因组 DNA 的提取 | 第25页 |
| ·漆酶基因的克隆 | 第25-26页 |
| ·核酸片断的纯化 | 第26页 |
| ·质粒的提取 | 第26页 |
| ·酶切体系 | 第26页 |
| ·重组载体的构建 | 第26-27页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第27-28页 |
| ·转化 | 第28页 |
| ·阳性转化子的筛选 | 第28页 |
| ·目的基因在大肠杆菌中的表达检测 | 第28页 |
| ·漆酶的高级结构预测 | 第28页 |
| ·表达产物的纯化 | 第28-29页 |
| ·蛋白含量测定 | 第29页 |
| ·漆酶酶学性质分析 | 第29-31页 |
| 4 结果和分析 | 第31-44页 |
| ·引物 | 第31页 |
| ·解淀粉芽孢杆菌漆酶基因的克隆 | 第31-34页 |
| ·PCR 扩增漆酶基因 | 第31页 |
| ·漆酶基因的 TA 克隆及测序结果 | 第31-34页 |
| ·漆酶高级结构预测 | 第34-36页 |
| ·漆酶二级结构预测 | 第34-35页 |
| ·漆酶三级结构的预测 | 第35-36页 |
| ·漆酶基因的原核表达 | 第36-39页 |
| ·pET21b-lac 的构建 | 第36页 |
| ·pET21b-lac 表达产物的检测结果 | 第36-37页 |
| ·诱导表达条件的优化 | 第37-39页 |
| ·漆酶蛋白的纯化 | 第39页 |
| ·漆酶的酶学性质 | 第39-44页 |
| ·最适反应 pH | 第39-40页 |
| ·pH 稳定性 | 第40-41页 |
| ·最适反应温度 | 第41页 |
| ·温度稳定性 | 第41-42页 |
| ·二价金属离子对酶活的影响 | 第42页 |
| ·漆酶的Km | 第42-44页 |
| 5 结论和讨论 | 第44-46页 |
| ·结论 | 第44页 |
| ·讨论 | 第44页 |
| ·展望 | 第44-46页 |
| 参考文献 | 第46-51页 |
| ABSTRACT | 第51-52页 |