| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-11页 |
| 目录 | 第11-15页 |
| CONTENTS | 第15-19页 |
| 英文缩写 | 第19-20页 |
| 第1章 绪论 | 第20-40页 |
| ·微孢子虫基因组学 | 第20-26页 |
| ·微孢子虫基因组研究进展 | 第20-23页 |
| ·微孢子虫基因组的特点 | 第23-26页 |
| ·微孢子虫与宿主的免疫应答反应 | 第26-32页 |
| ·哺乳动物与微孢子虫之间的免疫应答反应 | 第26-29页 |
| ·鱼与微孢子虫之间的免疫应答反应 | 第29-31页 |
| ·昆虫与微孢子虫之间的免疫应答反应 | 第31-32页 |
| ·与侵染有关的微孢子虫结构蛋白的研究进展 | 第32-35页 |
| ·微孢子虫极丝蛋白的研究 | 第32-33页 |
| ·微孢子虫孢壁蛋白的研究 | 第33-35页 |
| ·研究目的及意义 | 第35-36页 |
| ·研究内容 | 第36-38页 |
| ·实验技术路线 | 第38-39页 |
| ·创新点 | 第39-40页 |
| 第2章 家蚕微孢子虫孢壁蛋白 SWP26 的时相表达分析 | 第40-48页 |
| ·前言 | 第40页 |
| ·材料与主要试剂 | 第40-41页 |
| ·材料与试剂 | 第40页 |
| ·主要实验仪器和设备 | 第40-41页 |
| ·主要试剂的配制 | 第41页 |
| ·实验方法 | 第41-45页 |
| ·病原接种 | 第41-42页 |
| ·家蚕微孢子虫基因组 DNA 的提取 | 第42页 |
| ·家蚕中肠组织总 RNA 的提取和鉴定 | 第42-43页 |
| ·RNA 的浓度测定 | 第43页 |
| ·总 RNA 中基因组 DNA 的去除 | 第43页 |
| ·反转录实验 | 第43-44页 |
| ·孢壁蛋白 SWP26 基因的 RT-PCR 扩增 | 第44-45页 |
| ·结果与分析 | 第45-46页 |
| ·RNA 的提取质量检测 | 第45页 |
| ·家蚕微孢子虫β-微管蛋白基因的 RT-PCR 分析 | 第45页 |
| ·家蚕微孢子虫孢壁蛋白 SWP26 基因的 RT-PCR 分析 | 第45-46页 |
| ·讨论 | 第46-48页 |
| 第3章 家蚕微孢子虫孢壁蛋白 SWP26 在家蚕细胞 BmN 中的表达 | 第48-62页 |
| ·前言 | 第48页 |
| ·材料与主要试剂 | 第48-51页 |
| ·材料与试剂 | 第48-49页 |
| ·主要实验仪器和设备 | 第49页 |
| ·主要试剂的配制 | 第49-51页 |
| ·实验方法 | 第51-56页 |
| ·孢壁蛋白 SWP26 基因的 PCR 扩增 | 第51-52页 |
| ·重组质粒 PMD-18T-SWP26 和 PMD-18T-EGFP 的构建及序列测定 | 第52-53页 |
| ·重组转移载体的构建和鉴定 | 第53页 |
| ·重组家蚕杆状病毒质粒 Bacmid 的获得与鉴定 | 第53-54页 |
| ·家蚕 BmN 细胞的转染与感染 | 第54页 |
| ·重组蛋白在 BmN 细胞中的表达与 Western blot 鉴定 | 第54-56页 |
| ·结果与分析 | 第56-61页 |
| ·SWP26 基因的扩增 | 第56-57页 |
| ·重组杆状病毒的构建与鉴定 | 第57-58页 |
| ·EGFP-SWP26 融合蛋白在 BmN 细胞中的表达与鉴定 | 第58-61页 |
| ·讨论 | 第61-62页 |
| 第4章 家蚕微孢子虫孢壁蛋白 SWP26 互作宿主蛋白的筛选与鉴定 | 第62-82页 |
| ·前言 | 第62页 |
| ·材料与主要试剂 | 第62-64页 |
| ·材料与试剂 | 第62页 |
| ·主要实验仪器和设备 | 第62页 |
| ·主要试剂的配制 | 第62-64页 |
| ·实验方法 | 第64-69页 |
| ·病毒感染 BmN 细胞的裂解 | 第64页 |
| ·免疫共沉淀实验 | 第64页 |
| ·SDS-PAGE 电泳分析与质谱鉴定 | 第64-65页 |
| ·家蚕类海龟蛋白的克隆与序列分析 | 第65页 |
| ·酵母 Y2HGold 感受态细胞的制备 | 第65-66页 |
| ·酵母菌株的保存与复苏 | 第66页 |
| ·诱饵载体与捕获载体的构建 | 第66-67页 |
| ·载体质粒转化酵母感受态细胞 | 第67-68页 |
| ·自激活检测和毒性检测 | 第68页 |
| ·酵母质粒的提取 | 第68-69页 |
| ·提取酵母质粒的 PCR 鉴定 | 第69页 |
| ·结果与分析 | 第69-77页 |
| ·免疫共沉淀和 SDS-PAGE 分析 | 第69-70页 |
| ·特异性蛋白条带的质谱分析 | 第70-72页 |
| ·家蚕类海龟蛋白基因的克隆与序列分析 | 第72-74页 |
| ·诱饵载体和捕获载体的构建结果 | 第74页 |
| ·目的载体的毒性和自激活性检测 | 第74-75页 |
| ·SWP26 与 BmTLP 之间互作的验证 | 第75页 |
| ·酵母重组质粒的 PCR 鉴定 | 第75-77页 |
| ·讨论 | 第77-82页 |
| 第5章 BmTLP 基因的时相表达与原核表达分析 | 第82-92页 |
| ·前言 | 第82页 |
| ·材料与主要试剂 | 第82页 |
| ·实验方法 | 第82-86页 |
| ·病原接种、中肠组织总 RNA 的提取与浓度测定 | 第82页 |
| ·实时荧光定量 PCR | 第82-83页 |
| ·实时荧光定量 PCR 的结果分析 | 第83-84页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第84页 |
| ·BL21 感受态细胞的制备 | 第84页 |
| ·融合蛋白的诱导表达 | 第84-85页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第85-86页 |
| ·融合蛋白表达结果的鉴定 | 第86页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第86页 |
| ·结果与分析 | 第86-90页 |
| ·Real-time PCR 中扩增曲线和溶解曲线 | 第86-88页 |
| ·家蚕 BmTLP 感染家蚕微孢子虫的时相表达差异 | 第88页 |
| ·家蚕 BmTLP 蛋白的体外重组表达和检测 | 第88-90页 |
| ·讨论 | 第90-92页 |
| 结论与展望 | 第92-96页 |
| 研究结论 | 第92-93页 |
| 研究展望 | 第93-96页 |
| 参考文献 | 第96-112页 |
| 附录 | 第112-120页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第120-122页 |
| 致谢 | 第122页 |
