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SYBRGreen Ⅰ荧光定量RT-PCR检测J亚群禽白血病病毒方法的建立及应用

摘要第1-4页
Abstract第4-8页
图表目录第8-9页
本论文常用中英文缩写词第9-10页
文献综述第10-20页
引言第20-21页
1 材料与方法第21-29页
   ·细胞、毒株、疫苗毒及鸡胚第21页
   ·酶类与主要试剂(盒)第21页
   ·主要溶液与培养基的配制第21-23页
     ·细胞培养所需溶液的配制与处理第21-22页
     ·RNA 提取相关溶液配制第22页
     ·感受态细胞制备所需溶液的配制第22-23页
     ·主要培养基配制第23页
   ·主要仪器第23页
   ·J 亚群禽白血病病毒的培养第23-24页
     ·鸡胚成纤维细胞的制备与传代第23-24页
     ·标准毒株的培养第24页
   ·ALV-J 阳性标准品的制备第24-26页
     ·标准毒株的 RNA 提取第24页
     ·cDNA 合成第24-25页
     ·PCR 扩增与产物纯化第25页
     ·大肠杆菌感受态细胞的制备第25页
     ·目的基因片段与质粒载体的连接反应第25页
     ·重组质粒的转化与鉴定第25-26页
   ·SYBRGreenⅠ荧光定量 RT-PCR 方法的建立第26页
     ·反应体系与条件的优化第26页
     ·标准曲线的建立第26页
     ·荧光定量 RT-PCR 方法的特异性检测第26页
     ·荧光定量 RT-PCR 方法的灵敏性检测第26页
     ·荧光定量 RT-PCR 方法的重复稳定性检测第26页
   ·SYBRGreenⅠ荧光定量 RT-PCR 方法的应用第26-29页
     ·临床病料的检测第26-27页
       ·临床病料的采集、运输与保存第26页
       ·病料组织 RNA 提取与 cDNA 合成第26-27页
       ·荧光定量 RT-PCR 方法检测第27页
       ·病毒的分离与 PCR 扩增、测序鉴定第27页
     ·ALV-J 基因在不同脏器中分布与 mRNA 表达水平检测第27页
       ·阳性感染鸡不同组织 RNA 提取与 cDNA 合成第27页
       ·ALV-J 基因 mRNA 表达水平检测第27页
     ·疫苗毒的检测第27-29页
2 结果与分析第29-38页
   ·pol-gp85 基因片段的扩增与重组质粒的构建第29页
   ·SYBRGreenⅠ荧光定量 RT-PCR 方法的建立第29-32页
     ·RT-PCR 反应体系与反应条件的优化第29页
     ·阳性标准品的实时扩增与标准曲线的建立第29-30页
     ·荧光定量 RT-PCR 方法的特异性第30-31页
     ·荧光定量 RT-PCR 方法的灵敏性第31-32页
     ·荧光定量 RT-PCR 方法的重复稳定性第32页
   ·临床病料的检测结果第32-35页
     ·病鸡的剖检病变第32-33页
     ·荧光定量 RT-PCR 方法检测临床病料结果第33-34页
     ·病毒的分离与 PCR 扩增、测序结果第34-35页
   ·ALV-J 基因在不同脏器中分布与 mRNA 表达水平第35-36页
   ·荧光定量 RT-PCR 方法检测疫苗结果第36-38页
3 讨论第38-41页
   ·J 亚群禽白血病的危害与快速诊断第38-39页
   ·安徽省鸡群中 ALV-J 的感染情况第39-40页
   ·ALV-J 在不同脏器中的分布与表达第40-41页
结论第41-42页
参考文献第42-47页
附录第47-50页
致谢第50-51页
作者简介第51页

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