中文摘要 | 第1-8页 |
Abstract | 第8-14页 |
英文缩略表 | 第14-16页 |
第一章 文献综述 | 第16-25页 |
·鸡球虫病简介 | 第16-18页 |
·鸡球虫分类 | 第16页 |
·鸡球虫生活史 | 第16-17页 |
·防治 | 第17-18页 |
·顶复器原虫入侵相关蛋白的研究进展 | 第18-20页 |
·微线蛋白 | 第18-19页 |
·棒状体蛋白 | 第19页 |
·致密颗粒蛋白 | 第19-20页 |
·顶复器原虫AMA1 基因的研究进展 | 第20-21页 |
·酵母双杂交(Yeast two-hybrid, Y2H)的研究进展 | 第21-24页 |
·结语 | 第24-25页 |
第二章 柔嫩艾美耳球虫子孢子酵母双杂交cDNA文库的构建 | 第25-44页 |
·材料与方法 | 第25-38页 |
·实验动物 | 第25-26页 |
·实验虫株 | 第26页 |
·主要试剂 | 第26页 |
·各种试剂的配制 | 第26-28页 |
·主要仪器 | 第28页 |
·引物 | 第28页 |
·柔嫩艾美耳球虫未孢子化卵囊、孢子化卵囊和子孢子的制备 | 第28-31页 |
·柔嫩艾美耳球虫子孢子总RNA的提取 | 第31页 |
·柔嫩艾美耳球虫子孢子mRNA的分离 | 第31-32页 |
·柔嫩艾美耳球虫子孢子酵母双杂交cDNA文库的构建 | 第32-36页 |
·酵母双杂交cDNA文库的质量鉴定 | 第36-38页 |
·结果 | 第38-41页 |
·柔嫩艾美耳球虫子孢子总RNA的提取和mRNA的分离 | 第38页 |
·第一链cDNA的合成 | 第38页 |
·双链cDNA产物的扩增及其纯化 | 第38页 |
·cDNA文库的鉴定 | 第38-41页 |
·特异性引物扩增球虫基因 | 第41页 |
·讨论 | 第41-44页 |
第三章 pGBKT7-EtAMA1 诱饵载体的构建 | 第44-62页 |
·材料和方法 | 第44-56页 |
·菌株 | 第44页 |
·主要试剂 | 第44-45页 |
·主要仪器 | 第45页 |
·主要试剂的配制 | 第45-47页 |
·构建pGBKT7-EtAMA1 诱饵载体 | 第47-51页 |
·酵母株Y187 感受态细胞的制备 | 第51页 |
·转化pGBKT7-EtAMA1 质粒入Y187 酵母株感受态细胞 | 第51页 |
·缺陷性平板筛选转化子 | 第51-52页 |
·pGBKT7-EtAMA1 的自转录活性检测 | 第52页 |
·pGBKT7-EtAMA1 诱饵载体的细胞毒性检测 | 第52-53页 |
·pGBKT7-EtAMA1 在酵母细胞中蛋白表达的检测 | 第53-56页 |
·结果 | 第56-60页 |
·重组质粒pGBKT7- EtAMA1 的构建 | 第56-57页 |
·pGBKT7-EtAMA1 自转录活性检测 | 第57-58页 |
·重组质粒 pGBKT7-EtAMA1 细胞毒性检测 | 第58页 |
·pGBKT7- EtAMA1 蛋白的Western blot检测 | 第58-60页 |
·讨论 | 第60-62页 |
第四章 酵母双杂交筛选与EtAMA1 蛋白的相互作用蛋白 | 第62-73页 |
·材料与方法 | 第62-67页 |
·菌株 | 第62页 |
·主要试剂 | 第62页 |
·主要仪器 | 第62-63页 |
·用pGBKT7-EtAMA1 靶菌株从酵母双杂交cDNA文库中筛选相互作用蛋白 | 第63-65页 |
·PCR鉴定蓝斑克隆中插入cDNA的片段 | 第65页 |
·抽提PCR阳性蓝斑克隆质粒 | 第65-66页 |
·获得插入片段质粒 | 第66页 |
·回复杂交 | 第66-67页 |
·结果 | 第67-71页 |
·杂交效率 | 第67页 |
·筛选到的克隆数 | 第67-68页 |
·筛选到阳性克隆 | 第68页 |
·PCR扩增蓝斑克隆中cDNA插入片段 | 第68-69页 |
·获取插入片段质粒 | 第69页 |
·回复杂交 | 第69-70页 |
·阳性质粒测序结果 | 第70-71页 |
·讨论 | 第71-73页 |
第五章 全文结论 | 第73-75页 |
致谢 | 第75-76页 |
参考文献 | 第76-84页 |
作者简历 | 第84-85页 |