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柔嫩艾美耳球虫子孢子酵母双杂交cDNA文库的构建及EtAMA1相互作用蛋白的初步筛选

中文摘要第1-8页
Abstract第8-14页
英文缩略表第14-16页
第一章 文献综述第16-25页
   ·鸡球虫病简介第16-18页
     ·鸡球虫分类第16页
     ·鸡球虫生活史第16-17页
     ·防治第17-18页
   ·顶复器原虫入侵相关蛋白的研究进展第18-20页
     ·微线蛋白第18-19页
     ·棒状体蛋白第19页
     ·致密颗粒蛋白第19-20页
   ·顶复器原虫AMA1 基因的研究进展第20-21页
   ·酵母双杂交(Yeast two-hybrid, Y2H)的研究进展第21-24页
   ·结语第24-25页
第二章 柔嫩艾美耳球虫子孢子酵母双杂交cDNA文库的构建第25-44页
   ·材料与方法第25-38页
     ·实验动物第25-26页
     ·实验虫株第26页
     ·主要试剂第26页
     ·各种试剂的配制第26-28页
     ·主要仪器第28页
     ·引物第28页
     ·柔嫩艾美耳球虫未孢子化卵囊、孢子化卵囊和子孢子的制备第28-31页
     ·柔嫩艾美耳球虫子孢子总RNA的提取第31页
     ·柔嫩艾美耳球虫子孢子mRNA的分离第31-32页
     ·柔嫩艾美耳球虫子孢子酵母双杂交cDNA文库的构建第32-36页
     ·酵母双杂交cDNA文库的质量鉴定第36-38页
   ·结果第38-41页
     ·柔嫩艾美耳球虫子孢子总RNA的提取和mRNA的分离第38页
     ·第一链cDNA的合成第38页
     ·双链cDNA产物的扩增及其纯化第38页
     ·cDNA文库的鉴定第38-41页
     ·特异性引物扩增球虫基因第41页
   ·讨论第41-44页
第三章 pGBKT7-EtAMA1 诱饵载体的构建第44-62页
   ·材料和方法第44-56页
     ·菌株第44页
     ·主要试剂第44-45页
     ·主要仪器第45页
     ·主要试剂的配制第45-47页
     ·构建pGBKT7-EtAMA1 诱饵载体第47-51页
     ·酵母株Y187 感受态细胞的制备第51页
     ·转化pGBKT7-EtAMA1 质粒入Y187 酵母株感受态细胞第51页
     ·缺陷性平板筛选转化子第51-52页
     ·pGBKT7-EtAMA1 的自转录活性检测第52页
     ·pGBKT7-EtAMA1 诱饵载体的细胞毒性检测第52-53页
     ·pGBKT7-EtAMA1 在酵母细胞中蛋白表达的检测第53-56页
   ·结果第56-60页
     ·重组质粒pGBKT7- EtAMA1 的构建第56-57页
     ·pGBKT7-EtAMA1 自转录活性检测第57-58页
     ·重组质粒 pGBKT7-EtAMA1 细胞毒性检测第58页
     ·pGBKT7- EtAMA1 蛋白的Western blot检测第58-60页
   ·讨论第60-62页
第四章 酵母双杂交筛选与EtAMA1 蛋白的相互作用蛋白第62-73页
   ·材料与方法第62-67页
     ·菌株第62页
     ·主要试剂第62页
     ·主要仪器第62-63页
     ·用pGBKT7-EtAMA1 靶菌株从酵母双杂交cDNA文库中筛选相互作用蛋白第63-65页
     ·PCR鉴定蓝斑克隆中插入cDNA的片段第65页
     ·抽提PCR阳性蓝斑克隆质粒第65-66页
     ·获得插入片段质粒第66页
     ·回复杂交第66-67页
   ·结果第67-71页
     ·杂交效率第67页
     ·筛选到的克隆数第67-68页
     ·筛选到阳性克隆第68页
     ·PCR扩增蓝斑克隆中cDNA插入片段第68-69页
     ·获取插入片段质粒第69页
     ·回复杂交第69-70页
     ·阳性质粒测序结果第70-71页
   ·讨论第71-73页
第五章 全文结论第73-75页
致谢第75-76页
参考文献第76-84页
作者简历第84-85页

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