| 目录 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 英文縮略词表 | 第12-13页 |
| 第一篇 文献综述 | 第13-45页 |
| 第一章 猪瘟的概述 | 第13-25页 |
| 1 猪瘟流行病学 | 第13-15页 |
| ·猪瘟的国际流行趋势 | 第14-15页 |
| ·猪瘟的国内流行趋势 | 第15页 |
| 2 猪瘟临床及病理表现 | 第15-16页 |
| 3 猪瘟的诊断 | 第16-19页 |
| ·临床诊断 | 第16页 |
| ·动物接种实验 | 第16页 |
| ·病毒的分离鉴定 | 第16-17页 |
| ·血清学诊断方法 | 第17页 |
| ·免疫酶测定技术或酶标记抗体诊断法 | 第17-18页 |
| ·单克隆抗体诊断法 | 第18页 |
| ·分子生物学诊断方法 | 第18-19页 |
| 4 猪瘟疫苗的研究进展 | 第19-22页 |
| ·传统疫苗 | 第19页 |
| ·新型疫苗 | 第19-21页 |
| ·新型疫苗的展望 | 第21-22页 |
| 参考文献 | 第22-25页 |
| 第二章 猪瘟病毒的概述 | 第25-39页 |
| 1 病毒的基本生物学特性 | 第25-27页 |
| ·病毒粒子的形态结构和理化特性 | 第25页 |
| ·病毒的培养特性 | 第25-26页 |
| ·病毒的血清型、毒力及抗原性 | 第26页 |
| ·猪瘟病毒的进化和遗传分型 | 第26-27页 |
| 2 病毒的分子生物学特征 | 第27-34页 |
| ·病毒的基因组结构 | 第27-28页 |
| ·病毒粒子编码的几种蛋白及其功能 | 第28-34页 |
| 参考文献 | 第34-39页 |
| 第三章 毕赤酵母表达系统概述 | 第39-45页 |
| 1 酵母表达系统的发展 | 第39-40页 |
| 2 毕赤酵母表达系统的特点 | 第40-41页 |
| ·酵母表达载体 | 第40页 |
| ·宿主细胞 | 第40页 |
| ·培养条件 | 第40-41页 |
| ·影响外源基因表达的主要因素 | 第41页 |
| 3 毕赤酵母表达的缺陷及应用前景 | 第41-43页 |
| 参考文献 | 第43-45页 |
| 第二篇 研究内容 | 第45-101页 |
| 第一章 山东省部分规模化猪场猪瘟监测与分析 | 第45-55页 |
| 摘要 | 第45页 |
| 1 材料 | 第45-46页 |
| ·被检样品 | 第45-46页 |
| ·试剂 | 第46页 |
| 2 方法 | 第46-48页 |
| ·猪瘟抗体的检测 | 第46-47页 |
| ·猪瘟抗原的检测方法 | 第47-48页 |
| 3 结果 | 第48-49页 |
| ·免疫猪场的猪瘟抗体检测结果 | 第48-49页 |
| ·免疫猪场的猪瘟抗原检测结果 | 第49页 |
| 4 分析和讨论 | 第49-52页 |
| 参考文献 | 第52-53页 |
| ABSTRACT | 第53-55页 |
| 第二章 猪瘟病毒的分离鉴定 | 第55-65页 |
| 摘要 | 第55页 |
| 1 材料 | 第55-56页 |
| ·病料 | 第55页 |
| ·试剂 | 第55-56页 |
| ·病毒分离所用细胞及培养基 | 第56页 |
| ·引物设计 | 第56页 |
| 2 方法 | 第56-59页 |
| ·病料处理 | 第56页 |
| ·病毒RNA的提取 | 第56-57页 |
| ·cDNA的扩增 | 第57页 |
| ·电泳 | 第57-58页 |
| ·病毒分离 | 第58页 |
| ·病毒的鉴定 | 第58-59页 |
| 3 结果 | 第59-61页 |
| ·猪瘟病料的RT-PCR阳性鉴定 | 第59-60页 |
| ·病毒的分离与鉴定 | 第60-61页 |
| 4 分析和讨论 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-64页 |
| ABSTRACT | 第64-65页 |
| 第三章 猪瘟分离株E2基因序列的克隆与变异性分析 | 第65-83页 |
| 摘要 | 第65-66页 |
| 1 材料 | 第66-67页 |
| ·毒株及菌株 | 第66页 |
| ·试剂 | 第66页 |
| ·引物 | 第66-67页 |
| 2 方法 | 第67-71页 |
| ·病毒总RNA的提取 | 第67页 |
| ·cDNA的扩增 | 第67页 |
| ·RT-PCR产物的回收与纯化 | 第67-68页 |
| ·回收E2基因与pGEM-T克隆载体的连接 | 第68页 |
| ·连接产物的转化 | 第68-69页 |
| ·使用SP6、T7通用引物对筛选的阳性菌落进行PCR检测 | 第69页 |
| ·pGEM-T-E2质粒的提取 | 第69-70页 |
| ·pGEM-T-E2质粒的双酶切鉴定 | 第70-71页 |
| ·测序与序列分析 | 第71页 |
| 3 结果 | 第71-77页 |
| ·CSFV E2基因的克隆及鉴定 | 第71-72页 |
| ·核苷酸和氨基酸的同源性分析及序列比对 | 第72-76页 |
| ·遗传进化树分析 | 第76-77页 |
| 4 讨论和分析 | 第77-80页 |
| ·引物的设计 | 第77页 |
| ·同源性分析 | 第77-78页 |
| ·氨基酸序列分析 | 第78-79页 |
| ·遗传树分析 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-81页 |
| ABSTRACT | 第81-83页 |
| 第四章 猪瘟E2基因的毕赤酵母表达 | 第83-101页 |
| 摘要 | 第83页 |
| 1 材料 | 第83-84页 |
| ·模板菌株及血清 | 第83页 |
| ·质粒与菌株 | 第83-84页 |
| ·试剂 | 第84页 |
| ·引物 | 第84页 |
| 2 方法 | 第84-90页 |
| ·猪瘟疫苗毒株E2基因的克隆 | 第84-85页 |
| ·克隆载体的构建与鉴定 | 第85页 |
| ·表达载体的构建与鉴定 | 第85-86页 |
| ·重组酵母的构建与筛选 | 第86-88页 |
| ·重组酵母的诱导表达 | 第88页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE和Western-Blot | 第88-90页 |
| 3 结果 | 第90-95页 |
| ·猪瘟E2基因的克隆与序列分析 | 第90-92页 |
| ·E2重组真核表达质粒的筛选与鉴定 | 第92-93页 |
| ·重组酵母的构建、筛选与鉴定 | 第93-94页 |
| ·表达产物E2蛋白的SDS-PAGE | 第94-95页 |
| ·表达产物的Western blot分析 | 第95页 |
| 4 讨论与分析 | 第95-98页 |
| 参考文献 | 第98-99页 |
| ABSTRACT | 第99-101页 |
| 全文总结 | 第101-103页 |
| 附录 | 第103-107页 |
| 致谢 | 第107页 |