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A/Califonia/07/2009亚型猪流感冷适应减毒疫苗株的拯救及免疫效果评价

摘要第1-5页
Abstract第5-15页
1 引言第15-20页
   ·甲型H1N1 流感病毒的生物学性质第15-16页
   ·甲型H1N1 流感病毒的流行病学研究第16页
   ·H1N1 流感的诊断第16-17页
     ·临床诊断第16-17页
     ·基因诊断第17页
   ·H1N1 流感的治疗与预防第17-19页
     ·甲型H1N1 流感的治疗第17页
     ·流感疫苗第17-19页
   ·本研究目的和意义第19-20页
2 试验一甲型H1N1 亚型减毒流感病毒株的拯救及鉴定第20-41页
   ·材料第20-22页
     ·质粒、细胞及鸡胚第20页
     ·主要试剂第20-21页
     ·主要仪器第21页
     ·主要溶液配置第21-22页
     ·分子生物学分析软件第22页
   ·方法第22-33页
     ·引物的设计与合成第22-23页
     ·HA、NA基因片段扩增第23页
     ·PCR产物、酶切产物的电泳及纯化第23-24页
     ·HA、NA、pAD3000 的酶切第24页
     ·回收HA和NA基因及pAD3000 载体第24页
     ·pAD-HA、pAD-NA的构建第24-26页
     ·转染 8 质粒的提取第26页
     ·质粒共转染细胞第26-27页
     ·病毒的检测与鉴定第27-33页
   ·结果第33-39页
     ·重组质粒pAD-HA、pAD-NA的构建第33-34页
     ·重组 8 质粒的构建第34页
     ·8质粒转染MDCK-COS1 细胞第34-35页
     ·重配CA/AA ca病毒血凝抑制(HI)试验第35页
     ·RT-PCR检测第35-36页
     ·间接免疫荧光检测(IFA)第36页
     ·重配病毒的电镜观察第36-37页
     ·重配病毒的SDS-PAGE电泳鉴定第37页
     ·鸡胚半数感染剂量(EID 50)的测定第37-38页
     ·病毒TCID 50的测定第38页
     ·MDCK细胞的病变观察(CPE)第38-39页
     ·重配病毒冷适应表型的鉴定第39页
     ·重配病毒的稳定性实验第39页
   ·讨论与小结第39-41页
     ·讨论第39-41页
     ·小结第41页
3 试验二甲型H1N1 亚型减毒流感疫苗毒种库的建立及病毒纯化第41-51页
   ·材料第42-43页
     ·主要试剂第42页
     ·主要设备第42页
     ·主要溶液配置第42-43页
   ·方法第43-47页
     ·流感病毒种子批的制备第43-44页
     ·病毒种子批的检测第44-45页
     ·种子批病毒培养时间及培养温度的研究第45页
     ·流感病毒的培养和收获第45-46页
     ·流感病毒液澄清和超滤浓缩第46页
     ·蔗糖密度梯度离心纯化流感病毒第46页
     ·纯化CA/AA ca流感病毒的电镜观察第46页
     ·CA/AA ca流感病毒的TCID50的检测第46-47页
   ·结果第47-50页
     ·主代与工作种子批制备(稀释度确定)第47页
     ·种子批的检定第47-48页
     ·CA/AA ca流感病毒培养时间及温度的测定第48-49页
     ·蔗糖密度梯度离心纯化CA/AA ca流感病毒第49页
     ·CA/AA ca亚型猪流感病毒的TCID 50的检测第49-50页
   ·讨论与小结第50-51页
     ·讨论第50页
     ·小结第50-51页
4 试验三甲型H1N1 亚型减毒流感病毒免疫效果评价第51-72页
   ·材料第51-52页
     ·主要试剂第51页
     ·主要仪器第51页
     ·主要试剂的配制第51-52页
   ·方法第52-58页
     ·CA/AA ca病毒、BJ501 病毒TCID 50鉴定第52-53页
     ·免疫方案第53-54页
       ·BALB/c小鼠免疫第53-54页
       ·雪貂免疫第54页
     ·标本的采集第54-55页
     ·小鼠血清抗体亚型效价检测第55-56页
     ·小鼠鼻腔灌洗液抗体效价检测第56页
     ·小鼠中和抗体效价检测 4.2.7 TCLD 50的测定第56页
     ·TCID 50的测定第56-57页
     ·T淋巴细胞增殖检测第57页
     ·小鼠脾淋巴上清液中的IFN-γ、IL-4、IL-6 检测第57-58页
     ·统计学方法第58页
   ·结果第58-68页
     ·H1N1(CA/AA ca、BJ501)流感病毒的胰酶依赖性检测第58页
     ·CA/AA ca病毒及BJ501 病毒的TCID 50测定第58-59页
     ·中和抗体的检测第59-60页
     ·鼻腔灌洗液中和抗体及IgA抗体的效价第60-61页
     ·IgG抗体亚型的测定第61页
     ·特异性IFN-γ、IL-4、IL-6 分泌型细胞的检测第61-64页
     ·CA/AA ca病毒载量的检测第64页
     ·H1N1(BJ501)流感病毒对小鼠致病性研究第64-65页
     ·小鼠器官的病毒载量第65页
     ·CA/AA ca病毒的免疫保护性研究第65-66页
     ·CA/AA ca病毒、BJ501 病毒免疫雪貂后精神状态死亡率、体重的观察 ..52第66页
     ·雪貂鼻腔病毒载量的检测第66-67页
     ·H1N1(CA/AA ca)在雪貂不同器官上的病毒载量测定第67页
     ·雪貂免疫保护性实验第67-68页
   ·讨论与小结第68-72页
     ·讨论第68-71页
     ·小结第71-72页
5 讨论第72-75页
   ·CA/AA ca流感病毒的拯救及鉴定第73页
   ·CA/AA ca流感病毒毒种子库的建立、鉴定及病毒纯化第73页
   ·CA/AA ca流感病毒在不同动物上的免疫原性及免疫保护性研究第73-75页
     ·减毒CA/AA ca病毒灵敏度的检测及免疫剂量的建立第73-74页
     ·CA/AA ca流感病毒综合免疫效果的观察第74页
     ·CA/AA ca流感病毒在小鼠上的免疫保护性研究第74-75页
     ·CA/AA ca流感病毒在雪貂上的免疫保护性研究第75页
6 结论第75-76页
7 创新点第76-78页
致谢第78-79页
参考文献第79-86页
附录第86-97页
作者简介第97页

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