摘要 | 第1-5页 |
Abstract | 第5-15页 |
1 引言 | 第15-20页 |
·甲型H1N1 流感病毒的生物学性质 | 第15-16页 |
·甲型H1N1 流感病毒的流行病学研究 | 第16页 |
·H1N1 流感的诊断 | 第16-17页 |
·临床诊断 | 第16-17页 |
·基因诊断 | 第17页 |
·H1N1 流感的治疗与预防 | 第17-19页 |
·甲型H1N1 流感的治疗 | 第17页 |
·流感疫苗 | 第17-19页 |
·本研究目的和意义 | 第19-20页 |
2 试验一甲型H1N1 亚型减毒流感病毒株的拯救及鉴定 | 第20-41页 |
·材料 | 第20-22页 |
·质粒、细胞及鸡胚 | 第20页 |
·主要试剂 | 第20-21页 |
·主要仪器 | 第21页 |
·主要溶液配置 | 第21-22页 |
·分子生物学分析软件 | 第22页 |
·方法 | 第22-33页 |
·引物的设计与合成 | 第22-23页 |
·HA、NA基因片段扩增 | 第23页 |
·PCR产物、酶切产物的电泳及纯化 | 第23-24页 |
·HA、NA、pAD3000 的酶切 | 第24页 |
·回收HA和NA基因及pAD3000 载体 | 第24页 |
·pAD-HA、pAD-NA的构建 | 第24-26页 |
·转染 8 质粒的提取 | 第26页 |
·质粒共转染细胞 | 第26-27页 |
·病毒的检测与鉴定 | 第27-33页 |
·结果 | 第33-39页 |
·重组质粒pAD-HA、pAD-NA的构建 | 第33-34页 |
·重组 8 质粒的构建 | 第34页 |
·8质粒转染MDCK-COS1 细胞 | 第34-35页 |
·重配CA/AA ca病毒血凝抑制(HI)试验 | 第35页 |
·RT-PCR检测 | 第35-36页 |
·间接免疫荧光检测(IFA) | 第36页 |
·重配病毒的电镜观察 | 第36-37页 |
·重配病毒的SDS-PAGE电泳鉴定 | 第37页 |
·鸡胚半数感染剂量(EID 50)的测定 | 第37-38页 |
·病毒TCID 50的测定 | 第38页 |
·MDCK细胞的病变观察(CPE) | 第38-39页 |
·重配病毒冷适应表型的鉴定 | 第39页 |
·重配病毒的稳定性实验 | 第39页 |
·讨论与小结 | 第39-41页 |
·讨论 | 第39-41页 |
·小结 | 第41页 |
3 试验二甲型H1N1 亚型减毒流感疫苗毒种库的建立及病毒纯化 | 第41-51页 |
·材料 | 第42-43页 |
·主要试剂 | 第42页 |
·主要设备 | 第42页 |
·主要溶液配置 | 第42-43页 |
·方法 | 第43-47页 |
·流感病毒种子批的制备 | 第43-44页 |
·病毒种子批的检测 | 第44-45页 |
·种子批病毒培养时间及培养温度的研究 | 第45页 |
·流感病毒的培养和收获 | 第45-46页 |
·流感病毒液澄清和超滤浓缩 | 第46页 |
·蔗糖密度梯度离心纯化流感病毒 | 第46页 |
·纯化CA/AA ca流感病毒的电镜观察 | 第46页 |
·CA/AA ca流感病毒的TCID50的检测 | 第46-47页 |
·结果 | 第47-50页 |
·主代与工作种子批制备(稀释度确定) | 第47页 |
·种子批的检定 | 第47-48页 |
·CA/AA ca流感病毒培养时间及温度的测定 | 第48-49页 |
·蔗糖密度梯度离心纯化CA/AA ca流感病毒 | 第49页 |
·CA/AA ca亚型猪流感病毒的TCID 50的检测 | 第49-50页 |
·讨论与小结 | 第50-51页 |
·讨论 | 第50页 |
·小结 | 第50-51页 |
4 试验三甲型H1N1 亚型减毒流感病毒免疫效果评价 | 第51-72页 |
·材料 | 第51-52页 |
·主要试剂 | 第51页 |
·主要仪器 | 第51页 |
·主要试剂的配制 | 第51-52页 |
·方法 | 第52-58页 |
·CA/AA ca病毒、BJ501 病毒TCID 50鉴定 | 第52-53页 |
·免疫方案 | 第53-54页 |
·BALB/c小鼠免疫 | 第53-54页 |
·雪貂免疫 | 第54页 |
·标本的采集 | 第54-55页 |
·小鼠血清抗体亚型效价检测 | 第55-56页 |
·小鼠鼻腔灌洗液抗体效价检测 | 第56页 |
·小鼠中和抗体效价检测 4.2.7 TCLD 50的测定 | 第56页 |
·TCID 50的测定 | 第56-57页 |
·T淋巴细胞增殖检测 | 第57页 |
·小鼠脾淋巴上清液中的IFN-γ、IL-4、IL-6 检测 | 第57-58页 |
·统计学方法 | 第58页 |
·结果 | 第58-68页 |
·H1N1(CA/AA ca、BJ501)流感病毒的胰酶依赖性检测 | 第58页 |
·CA/AA ca病毒及BJ501 病毒的TCID 50测定 | 第58-59页 |
·中和抗体的检测 | 第59-60页 |
·鼻腔灌洗液中和抗体及IgA抗体的效价 | 第60-61页 |
·IgG抗体亚型的测定 | 第61页 |
·特异性IFN-γ、IL-4、IL-6 分泌型细胞的检测 | 第61-64页 |
·CA/AA ca病毒载量的检测 | 第64页 |
·H1N1(BJ501)流感病毒对小鼠致病性研究 | 第64-65页 |
·小鼠器官的病毒载量 | 第65页 |
·CA/AA ca病毒的免疫保护性研究 | 第65-66页 |
·CA/AA ca病毒、BJ501 病毒免疫雪貂后精神状态死亡率、体重的观察 ..52 | 第66页 |
·雪貂鼻腔病毒载量的检测 | 第66-67页 |
·H1N1(CA/AA ca)在雪貂不同器官上的病毒载量测定 | 第67页 |
·雪貂免疫保护性实验 | 第67-68页 |
·讨论与小结 | 第68-72页 |
·讨论 | 第68-71页 |
·小结 | 第71-72页 |
5 讨论 | 第72-75页 |
·CA/AA ca流感病毒的拯救及鉴定 | 第73页 |
·CA/AA ca流感病毒毒种子库的建立、鉴定及病毒纯化 | 第73页 |
·CA/AA ca流感病毒在不同动物上的免疫原性及免疫保护性研究 | 第73-75页 |
·减毒CA/AA ca病毒灵敏度的检测及免疫剂量的建立 | 第73-74页 |
·CA/AA ca流感病毒综合免疫效果的观察 | 第74页 |
·CA/AA ca流感病毒在小鼠上的免疫保护性研究 | 第74-75页 |
·CA/AA ca流感病毒在雪貂上的免疫保护性研究 | 第75页 |
6 结论 | 第75-76页 |
7 创新点 | 第76-78页 |
致谢 | 第78-79页 |
参考文献 | 第79-86页 |
附录 | 第86-97页 |
作者简介 | 第97页 |