| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-15页 |
| 第一章 引言 | 第15-28页 |
| ·猪圆环病毒 2 型病原学与流行病学研究进展 | 第15-23页 |
| ·发现和命名 | 第15页 |
| ·分类 | 第15-16页 |
| ·病原学 | 第16-20页 |
| ·基因进化分析与分型 | 第20-21页 |
| ·猪圆环病毒相关疾病 PCVD | 第21-22页 |
| ·流行病学 | 第22-23页 |
| ·猪圆环病毒 2 型免疫研究 | 第23-26页 |
| ·PCV2 与天然免疫反应系统的作用 | 第23-25页 |
| ·PCV2 感染对猪淋巴细胞及组织的影响 | 第25页 |
| ·PCV2 感染猪细胞及组织的细胞因子表达 | 第25-26页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第26-28页 |
| 第二章 猪圆环病毒 2 型的分离鉴定及序列分析 | 第28-47页 |
| ·材料 | 第28-30页 |
| ·病料收集及毒株背景 | 第28页 |
| ·主要试剂及材料 | 第28页 |
| ·主要试剂配制及制备 | 第28-29页 |
| ·主要仪器 | 第29-30页 |
| ·方法 | 第30-37页 |
| ·病料的处理 | 第30页 |
| ·病料 DNA 提取 | 第30-31页 |
| ·引物设计与合成 | 第31页 |
| ·PCR 检测组织病料中 PCV2 | 第31-32页 |
| ·PCR 产物克隆与测序 | 第32-34页 |
| ·筛选 PCV 阴性 PK-15 细胞 | 第34-35页 |
| ·病毒分离 | 第35页 |
| ·特异性 PCR 鉴定 | 第35页 |
| ·间接免疫荧光（IFA）检测 | 第35-36页 |
| ·分离病毒毒价的测定 | 第36页 |
| ·PCV2 全基因组的 PCR 扩增及测序 | 第36-37页 |
| ·PCV2 的基因组序列分析 | 第37页 |
| ·结果 | 第37-46页 |
| ·组织及血清样品 PCR 检测及测序结果 | 第37-39页 |
| ·PCV 阴性 PK-15 细胞的筛选 | 第39-41页 |
| ·分离病毒 PCR 鉴定 | 第41页 |
| ·间接免疫荧光检测 | 第41-42页 |
| ·病毒毒价滴定 | 第42-43页 |
| ·病毒全基因组的序列测定 | 第43-44页 |
| ·PCV2 全基因组序列分析结果 | 第44-46页 |
| ·讨论 | 第46-47页 |
| 第三章 猪圆环病毒 1 型及 2 型实时定量 PCR 检测方法的建立 | 第47-59页 |
| ·材料 | 第47-48页 |
| ·毒株、细胞株和菌株 | 第47页 |
| ·主要试剂及材料 | 第47页 |
| ·主要仪器设备 | 第47-48页 |
| ·方法 | 第48-51页 |
| ·引物设计与合成 | 第48页 |
| ·病毒 DNA 的提取 | 第48-49页 |
| ·荧光定量标准阳性模板的制备 | 第49-50页 |
| ·PCV 实时定量 PCR 方法的建立 | 第50页 |
| ·特异性试验 | 第50页 |
| ·敏感性试验 | 第50页 |
| ·重复性试验 | 第50-51页 |
| ·结果 | 第51-57页 |
| ·荧光定量标准阳性模板 | 第51-52页 |
| ·实时定量 PCR 测定 PCV 的标准曲线建立 | 第52-53页 |
| ·扩增产物的溶解曲线分析 | 第53-54页 |
| ·特异性检测结果 | 第54-55页 |
| ·敏感性检测结果 | 第55-56页 |
| ·重复性检测结果 | 第56-57页 |
| ·讨论 | 第57-59页 |
| 第四章 表达猪圆环病毒 2 型 CAP 蛋白的重组杆状病毒构建与鉴定 | 第59-70页 |
| ·材料 | 第59-60页 |
| ·主要试剂及材料 | 第59-60页 |
| ·主要仪器 | 第60页 |
| ·方法 | 第60-63页 |
| ·PCV2 的培养及 DNA 提取 | 第60-61页 |
| ·PCV2 的 ORF2 基因扩增 | 第61页 |
| ·PCR 产物克隆测序 | 第61-62页 |
| ·穿梭载体的构建 | 第62-63页 |
| ·重组 Bacmid 质粒的构建 | 第63页 |
| ·昆虫细胞的复苏与培养 | 第63页 |
| ·结果 | 第63-69页 |
| ·PCV2 的 ORF2 基因扩增、克隆及测序 | 第63-64页 |
| ·重组穿梭载体的构建与鉴定 | 第64-65页 |
| ·重组 Bacmid 构建与鉴定 | 第65页 |
| ·重组 rBac-Cap 的转染 | 第65-66页 |
| ·重组蛋白的 SDS-PAGE 和 Western-blot 鉴定 | 第66-68页 |
| ·免疫荧光鉴定重组 Cap 蛋白表达 | 第68页 |
| ·ELISA 法测定重组 Cap 蛋白的免疫原性 | 第68-69页 |
| ·讨论 | 第69-70页 |
| 第五章 猪圆环病毒 2 型 CAP 蛋白单克隆抗体的制备 | 第70-80页 |
| ·材料 | 第71-73页 |
| ·病毒、细胞及动物 | 第71页 |
| ·主要试剂及材料 | 第71页 |
| ·主要试剂配置 | 第71-72页 |
| ·主要仪器设备 | 第72-73页 |
| ·方法 | 第73-76页 |
| ·免疫原的制备 | 第73页 |
| ·动物及免疫 | 第73-74页 |
| ·骨髓瘤细胞的培养 | 第74页 |
| ·饲养细胞的准备 | 第74页 |
| ·免疫后小鼠的脾细胞制备 | 第74页 |
| ·融合 | 第74-75页 |
| ·ELISA 筛选杂交阳性瘤细胞 | 第75页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的克隆化培养 | 第75页 |
| ·对阳性单克隆细胞进行染色体分析 | 第75-76页 |
| ·腹水的制备 | 第76页 |
| ·单克隆抗体的效价测定 | 第76页 |
| ·单克隆抗体的类别鉴定 | 第76页 |
| ·间接免疫荧光鉴定 PCV2 病毒 | 第76页 |
| ·结果 | 第76-78页 |
| ·动物免疫情况 | 第76-77页 |
| ·杂交瘤细胞的融合、筛选、克隆 | 第77页 |
| ·腹水制备、效价测定、抗体类型鉴定 | 第77页 |
| ·阳性细胞株染色体分析 | 第77页 |
| ·间接免疫荧光试验 | 第77-78页 |
| ·讨论 | 第78-80页 |
| 第六章 猪圆环病毒 2 型感染外周血单核细胞的研究 | 第80-89页 |
| ·材料 | 第80-82页 |
| ·毒株、细胞株和菌株 | 第80页 |
| ·主要试剂及材料 | 第80-81页 |
| ·主要试剂配置及制备 | 第81页 |
| ·主要仪器设备 | 第81-82页 |
| ·方法 | 第82-85页 |
| ·引物设计与合成 | 第82页 |
| ·猪源外周血单核细胞的分离 | 第82-83页 |
| ·单核细胞感染 PCV2 病毒 | 第83页 |
| ·处理后单核细胞 RNA 的提取 | 第83-84页 |
| ·实时定量 PCR 检测趋化因子表达情况 | 第84-85页 |
| ·结果 | 第85-88页 |
| ·CCL2 和 CCR2 荧光定量 PCR 方法的建立 | 第85-87页 |
| ·PCR 定量检测 CCL2 和 CCR2 | 第87-88页 |
| ·讨论 | 第88-89页 |
| 第七章 猪圆环病毒 2 型感染单核源树突状细胞的研究 | 第89-96页 |
| ·材料 | 第89-91页 |
| ·毒株、细胞株和菌株 | 第89页 |
| ·主要试剂及材料 | 第89-90页 |
| ·主要试剂配置及制备 | 第90页 |
| ·主要仪器设备 | 第90-91页 |
| ·方法 | 第91-93页 |
| ·引物设计与合成 | 第91页 |
| ·猪源外周血单核细胞的分离 | 第91页 |
| ·单核细胞培养 | 第91页 |
| ·单核衍生树突状细胞的形态学观察 | 第91页 |
| ·单核衍生树突状细胞感染 PCV2 病毒 | 第91-92页 |
| ·单核衍生树突状细胞处理及 RNA 的提取 | 第92页 |
| ·实时定量 PCR 检测趋化因子表达情况 | 第92-93页 |
| ·结果 | 第93-95页 |
| ·单核细胞衍生的树突状细胞形态学观察 | 第93页 |
| ·CCR7 荧光定量 PCR 方法的建立 | 第93-94页 |
| ·PCR 定量检测 CCR7 | 第94-95页 |
| ·讨论 | 第95-96页 |
| 第八章 全文结论 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-110页 |
| 附录 | 第110-114页 |
| 致谢 | 第114-115页 |
| 作者简历 | 第115页 |
