| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略语表 | 第12-14页 |
| 1 前言 | 第14-31页 |
| ·苏云金芽胞杆菌及其杀虫活性 | 第14-19页 |
| ·苏云金芽胞杆菌 | 第14-15页 |
| ·苏云金芽胞杆菌的杀虫活性和杀虫机理 | 第15-16页 |
| ·昆虫体内可能对Bt杀虫晶体蛋白产生抗性的环节 | 第16-17页 |
| ·苏云金芽胞杆菌与蜡状芽胞杆菌群的系统学关系 | 第17-18页 |
| ·苏云金芽胞杆菌与昆虫的关系 | 第18-19页 |
| ·昆虫围食膜 | 第19-22页 |
| ·围食膜的种类 | 第19-20页 |
| ·围食膜组成成分及理化特性 | 第20页 |
| ·围食膜的功能 | 第20-22页 |
| ·昆虫肠粘蛋白 | 第22页 |
| ·昆虫杆状病毒增效蛋白 | 第22-26页 |
| ·增效蛋白及其杀虫增效作用 | 第23-25页 |
| ·昆虫病毒增效蛋白的功能域和氨基酸特征 | 第25页 |
| ·昆虫病毒增效蛋白对昆虫的弱化作用 | 第25-26页 |
| ·Bt中的增效蛋白类似基因 | 第26-27页 |
| ·科学问题 | 第27页 |
| ·研究目的和意义 | 第27-29页 |
| ·本研究的学术思想、理论根据及创新之处 | 第29-31页 |
| 2 材料与方法 | 第31-48页 |
| ·实验材料 | 第31-35页 |
| ·菌株、质粒和引物 | 第31-33页 |
| ·供试昆虫及饲料 | 第33-34页 |
| ·试剂,培养基,仪器 | 第34-35页 |
| ·实验方法 | 第35-48页 |
| ·DNA常规操作 | 第35-38页 |
| ·质粒的制备与纯化 | 第35-36页 |
| ·DNA的体外重组操作 | 第36-37页 |
| ·重组质粒的转化 | 第37-38页 |
| ·PCR扩增 | 第38页 |
| ·SDS-PAGE蛋白质电泳 | 第38页 |
| ·菌体蛋白样品的制备 | 第38页 |
| ·SDS-PAGE凝胶的制备 | 第38页 |
| ·电泳、染色及脱色 | 第38页 |
| ·苏云金芽胞杆菌菌株BMB171中bel基因的敲除 | 第38-41页 |
| ·同源重组 | 第39页 |
| ·复红简单染色 | 第39页 |
| ·伴胞晶体的培养 | 第39-40页 |
| ·生物测定 | 第40页 |
| ·菌体生长时间与菌体OD_(600)值对应曲线 | 第40-41页 |
| ·Cry1Ac晶体蛋白的表达 | 第41页 |
| ·杀虫晶体蛋白Cry1Ac的提纯和定量 | 第41-42页 |
| ·苏云金芽胞杆菌bel的表达 | 第42页 |
| ·苏云金芽胞杆菌Bel的提纯,定量和分子量的测定 | 第42-43页 |
| ·苏云金芽胞杆菌Bel的增效活性测定 | 第43-44页 |
| ·感染液的配制 | 第43页 |
| ·感染饲料的配制 | 第43页 |
| ·接虫感染 | 第43页 |
| ·结果统计及数据分析处理 | 第43-44页 |
| ·苏云金芽胞杆菌增效蛋白对棉铃虫生长的弱化作用 | 第44页 |
| ·感染液的配制 | 第44页 |
| ·接虫感染 | 第44页 |
| ·数据处理 | 第44页 |
| ·PM and IIM的制作 | 第44页 |
| ·石蜡切片制作 | 第44-46页 |
| ·扫描电镜样品的制作 | 第46页 |
| ·Western blot | 第46-48页 |
| 3 结果和分析 | 第48-76页 |
| ·bel基因的克隆及序列分析 | 第48-50页 |
| ·BMB171突变体的构建 | 第50-58页 |
| ·整合载体的构建 | 第50-52页 |
| ·突变体的筛选及验证 | 第52-53页 |
| ·BMB171和突变株BMB1084比较 | 第53-55页 |
| ·BMB171与突变株BMB1084生长情况的比较 | 第53-54页 |
| ·BMB171与突变株BMB1084芽胞形成的比较 | 第54-55页 |
| ·Bel蛋白基因对Bt杀棉铃虫幼虫的增效杀虫活性 | 第55-58页 |
| ·晶体蛋白基因cry1Ac在BMB171和突变株BMB1084表达 | 第55-56页 |
| ·生物测定 | 第56-58页 |
| ·杀虫晶体蛋白Cry1Ac的表达、提纯和检测 | 第58页 |
| ·增效蛋白Bel的原核表达,提纯及定量检测 | 第58-63页 |
| ·Bel蛋白的表达 | 第58-61页 |
| ·增效蛋白Bel的提纯 | 第61-63页 |
| ·增效蛋白Bel的定量检测 | 第63页 |
| ·生物活性测定 | 第63-65页 |
| ·增效蛋白对Cry1Ac杀虫的增效活性的测定 | 第63-65页 |
| ·增效蛋白Bel对棉铃虫幼虫生长的弱化作用 | 第65-66页 |
| ·Bel蛋白的增效机制研究 | 第66-68页 |
| ·体内Bel蛋白增效机制研究实验 | 第66-67页 |
| ·体外Bel蛋白体外降解肠粘蛋白活性 | 第67-68页 |
| ·Bel对粉纹夜蛾肠粘蛋白PM的作用 | 第67-68页 |
| ·Bel对棉铃虫肠粘蛋白HaIIM86的作用 | 第68页 |
| ·利用增效蛋白bel基因构建苏云金芽胞杆菌高效杀虫基因工程菌 | 第68-76页 |
| ·含bel基因的大肠杆菌-苏云金芽胞杆菌穿梭表达载体的构建 | 第68-71页 |
| ·增效蛋白Bel和杀虫晶体蛋白Cry1Ac共表达载体的构建 | 第71-73页 |
| ·增效蛋白基因bel在苏云金芽胞杆菌BMB171中的表达 | 第73-74页 |
| ·苏云金芽胞杆菌高效杀虫工程菌BMB0187对棉铃虫的生物测定 | 第74-76页 |
| 4 讨论 | 第76-80页 |
| ·Bel蛋白与病毒Enhancin蛋白的氨基酸序列比较 | 第76页 |
| ·Bel蛋白的表达和增效作用 | 第76-78页 |
| ·蜡状芽胞杆菌群的系统学关系 | 第78页 |
| ·bel基因的来源 | 第78-80页 |
| 5 总结 | 第80-82页 |
| 参考文献 | 第82-92页 |
| 致谢 | 第92-93页 |
| 附录 待发表论文和专利 | 第93-94页 |
| 附录 YBT1520的bel基因序列 | 第94-96页 |
