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漠斑牙鲆繁殖生理特性及促性腺激素的分子克隆研究

摘要第1-7页
ABSTRACT第7-14页
引言第14-16页
第一章 文献综述第16-24页
 1. 鱼类卵巢周年变化规律研究第16-19页
   ·鱼类卵巢发育类型及分期第16-17页
   ·鱼类卵细胞发生时相分期第17页
   ·鱼类卵巢闭锁现象第17-18页
   ·GSI、HSI 和 CF 的变化与卵巢发育的关系第18页
   ·鱼类卵巢年周期变化的国内研究进展第18-19页
 2. 鱼类性类固醇激素的研究进展第19-21页
   ·性类固醇激素的作用第19-21页
   ·鱼类性类固醇激素周年变化的国内外研究进展第21页
 3. 促性腺激素第21-24页
   ·FSH 和 LH 的研究第21-22页
   ·N-连接糖基化位点的研究第22页
   ·国内外对促性腺激素的研究进展第22-24页
第二章 漠斑牙鲆卵巢发育特征研究第24-36页
 1. 材料与方法第25-26页
   ·实验鱼培育第25页
   ·实验鱼的温光调控第25页
   ·取样方法与样品处理第25-26页
   ·数量特征测量及分析第26页
 2. 结果第26-33页
   ·漠斑牙鲆卵巢发育分期第26-27页
   ·漠斑牙鲆卵母细胞发育的形态学变化第27-30页
   ·GSI、HSI 和 CF 的季节变化规律第30-33页
 3. 讨论第33-36页
   ·漠斑牙鲆卵母细胞发育特征和产卵类型第33-34页
   ·GSI、HSI 和 CF 的变化与卵巢发育的关系第34-36页
第三章 漠斑牙鲆血浆性类固醇激素及促性腺激素表达水平的周年变化与卵巢发育的关系第36-52页
 1. 材料与方法第36-38页
   ·实验鱼培育第36页
   ·实验鱼的温光调控第36页
   ·实验设计第36-37页
     ·实验鱼取样第36-37页
     ·外源激素诱导亲鱼产卵实验第37页
   ·实验所用试剂和器材第37页
   ·性激素的 ELISA 测定相关方法和原理第37-38页
   ·性类固醇激素和促性腺激素的测定第38页
   ·数据统计分析第38页
 2. 结果第38-48页
   ·漠斑牙鲆雌鱼血浆中雌二醇的周年变化第38-40页
   ·漠斑牙鲆雌鱼血浆中睾酮的周年变化第40-41页
   ·漠斑牙鲆雌鱼血浆中孕酮的周年变化第41-43页
   ·漠斑牙鲆雌鱼血浆中 FSH 含量的周年变化第43-44页
   ·漠斑牙鲆雌鱼血浆中 LH 含量的周年变化第44-45页
   ·埋植外源激素(sGnRH)后漠斑牙鲆血浆中性类固醇激素含量的变化第45-48页
 3. 讨论第48-52页
第四章 漠斑牙鲆 FSHβ亚基,LHβ亚基的 cDNA 克隆和组织表达特征第52-79页
 1. 材料与方法第52-62页
   ·实验鱼第52页
   ·各组织取样第52-53页
   ·RNA 提取及反转录第53-56页
     ·总 RNA 的提取及浓度测定第53-54页
       ·总 RNA 提取方法第53页
       ·RNA 浓度测定方法第53-54页
     ·RNA 质量检测第54页
     ·cDNA 及 RACE-Ready-cDNA 的合成第54-56页
       ·cDNA 合成的实验步骤第54-55页
       ·3'-RACE-Ready cDNA 和 5'-RACE-Ready cDNA 合成的实验步骤第55-56页
   ·漠斑牙鲆 FSHβ亚基和 LHβ亚基的克隆第56-60页
     ·引物设计第56-58页
     ·核心序列 PCR 扩增的反应体系第58-60页
   ·PCR 产物的切胶回收、T 载体连接转化、培养和测序第60-61页
     ·PCR 产物切胶回收第60页
     ·T 载体连接转化和培养第60-61页
     ·菌液 PCR 和测序第61页
   ·序列拼接和比对第61页
   ·半定量表达分析第61-62页
 2. 结果第62-77页
   ·漠斑牙鲆垂体总 RNA 的提取第62页
   ·RACE 克隆过程中 PCR 电泳结果第62-64页
   ·FSHβ亚基和 LHβ亚基的 cDNA 序列、同源性比较和系统进化分析第64-73页
     ·FSHβ亚基和 LHβ亚基 cDNA 序列第64-67页
     ·FSH 和 LH 同源性比较第67-71页
     ·FSH 和 LH 基因的系统进化分析第71-73页
   ·FSH 和 LH mRNA 的组织特异性表达和季节性表达变化第73-77页
 3. 讨论第77-79页
结论第79-82页
参考文献第82-94页
致谢第94页

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