| 符号说明 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 1 引言 | 第10-27页 |
| ·脂肪沉积的调控及其分子机制 | 第10-17页 |
| ·脂肪组织的发育及脂类代谢的调控 | 第10-12页 |
| ·脂肪代谢调控的关键因素 | 第12-14页 |
| ·肌内脂肪 | 第14页 |
| ·相关功能基因研究进展 | 第14-17页 |
| ·PID1 基因的研究进展 | 第17-18页 |
| ·RNAi 技术的发现及发展 | 第18-22页 |
| ·RNA 干扰的作用机制 | 第18-19页 |
| ·RNAi 的生物学特点 | 第19页 |
| ·获得 siRNA 的方法 | 第19-20页 |
| ·RNAi 技术的应用及展望 | 第20-22页 |
| ·转基因动物研究进展 | 第22-25页 |
| ·显微注射法 | 第22-23页 |
| ·胚胎干细胞法 | 第23页 |
| ·体细胞、胚胎细胞克隆法 | 第23-24页 |
| ·精子介导法 | 第24-25页 |
| ·精原干细胞介导法 | 第25页 |
| ·转基因技术应用于基因沉默 | 第25页 |
| ·本研究的目的、意义及主要内容 | 第25-27页 |
| 2 材料与方法 | 第27-40页 |
| ·试验材料 | 第27-30页 |
| ·菌株、载体和细胞 | 第27页 |
| ·主要仪器 | 第27-28页 |
| ·酶和试剂 | 第28页 |
| ·实验所用试剂的配制 | 第28-30页 |
| ·主要数据库及生物软件 | 第30页 |
| ·试验方法 | 第30-39页 |
| ·RNA 表达载体的构建 | 第30-33页 |
| ·PID1 引物的设计及合成 | 第33-34页 |
| ·转染 shRNA 的细胞系的建立和干扰载体的转染 | 第34-35页 |
| ·RT-PCR 检测 PID1 mRNA 水平的表达 | 第35-37页 |
| ·Western blotting 检测 PID1 翻译水平的表达 | 第37-39页 |
| ·统计学分析 | 第39-40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-47页 |
| ·细胞转染 RNA 干扰载体后分析 | 第40页 |
| ·总 RNA 提取后电泳结果分析 | 第40-41页 |
| ·4 条最佳 siRNA、阴性对照寡核苷酸序列 shRNA 的合成 | 第41-42页 |
| ·pGPU6/GFP/Neo-shRNA 载体的测序鉴定 | 第42-43页 |
| ·pGPU6/GFP/Neo-shRNA 载体的酶切鉴定 | 第43-44页 |
| ·pGPU6/GFP/Neo-shRNA 对细胞 PID1 基因 mRNA 表达的影响 | 第44-45页 |
| ·pGPU6/GFP/Neo-shRNA 对细胞 PID1 基因蛋白表达的影响 | 第45-47页 |
| 4 讨论 | 第47-50页 |
| ·RNA 干扰载体的转染方法及对细胞的影响 | 第47页 |
| ·RNAi 技术在基因功能验证中的作用 | 第47-48页 |
| ·RNA 干扰载体的设计与干扰效率的关系 | 第48-50页 |
| 5 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 作者简介 | 第62页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第62页 |
