| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 英文缩写表 | 第8-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-22页 |
| 1 小菜蛾抗药性研究进展 | 第12-13页 |
| 2 BT毒素及其研究进展 | 第13-19页 |
| ·Bt毒素概况 | 第13-15页 |
| ·Bt毒素蛋白的作用机制 | 第15-16页 |
| ·Bt抗性 | 第16页 |
| ·Bt抗性机理 | 第16页 |
| ·昆虫Bt毒素的受体种类及其功能 | 第16-19页 |
| 3 BAC-TO-BAC杆状病毒表达系统 | 第19-21页 |
| 4 研究目的及意义 | 第21-22页 |
| 第二章 小菜蛾敏感、抗性品系中肠氨肽酶N(APN2)基因的克隆及序列分析 | 第22-38页 |
| 1 材料与方法 | 第22-23页 |
| ·供试昆虫 | 第22页 |
| ·供试蔬菜 | 第22-23页 |
| ·Cry1Ac晶体蛋白 | 第23页 |
| ·主要试剂 | 第23页 |
| 2 小菜蛾抗性、敏感品系中肠氨肽酶N(APN2 )的克隆及序列分析 | 第23-28页 |
| ·小菜蛾中肠总RNA的提取 | 第23-24页 |
| ·cDNA的合成 | 第24页 |
| ·PCR引物设计和扩增 | 第24-28页 |
| 3 结果与分析 | 第28-36页 |
| ·小菜蛾中肠总RNA的提取 | 第28页 |
| ·Actin引物检测合成的cDNA | 第28-29页 |
| ·抗性、敏感小菜蛾中肠APN2基因全长的扩增 | 第29页 |
| ·菌落PCR及质粒DNA的提取 | 第29-30页 |
| ·小菜蛾抗性、敏感品系APN2基因全长序列分析 | 第30-36页 |
| 4 小结与讨论 | 第36-38页 |
| 第三章 小菜蛾中肠氨肽酶N2(APN2)基因在昆虫细胞中的表达 | 第38-58页 |
| 1 材料与方法 | 第39-43页 |
| ·供试昆虫 | 第39页 |
| ·主要试剂 | 第39页 |
| ·主要溶液试剂配制 | 第39-43页 |
| 2 抗性、敏感品系小菜蛾中肠APN2 基因在SF9细胞中的表达 | 第43-51页 |
| ·表达全长引物的设计 | 第43页 |
| ·PCR扩增 | 第43-44页 |
| ·真核表达载体重组子pFASTBac HTB-APN2-S/R和pFASTBacDual-GFP的构建 | 第44-47页 |
| ·细胞的培养、转染及病毒的扩增 | 第47-50页 |
| ·抗性、敏感品系小菜蛾中肠APN2蛋白的获得 | 第50页 |
| ·重组蛋白的SDS-PAGE检测 | 第50-51页 |
| 3 结果与分析 | 第51-56页 |
| ·抗性、敏感品系小菜蛾APN2基因和GFP基因表达全长的扩增 | 第51-52页 |
| ·真核表达载体重组子pFASTBac HTB-APN2-S/R和pFASTBacDual-GFP的构建 | 第52-54页 |
| ·抗性、敏感品系小菜蛾中肠APN2在Sf9细胞系中的表达与鉴定 | 第54-56页 |
| 4 小结与讨论 | 第56-58页 |
| 第四章 小菜蛾敏感、抗性品系中肠氨肽酶N(APN2)重组蛋白的功能性分析 | 第58-66页 |
| 1 材料与方法 | 第58-59页 |
| ·供试昆虫 | 第58-59页 |
| ·主要试剂 | 第59页 |
| 2 抗性、敏感品系小菜蛾中肠APN2 重组蛋白的功能性分析 | 第59-61页 |
| ·APN2重组蛋白的Western blot分析 | 第59-60页 |
| ·APN2蛋白与Cry1Ac毒素的互作 | 第60-61页 |
| 3 结果与分析 | 第61-64页 |
| ·APN2重组蛋白的Western blot分析 | 第61-62页 |
| ·APN2重组蛋白的Far-western blot分析 | 第62-63页 |
| ·APN2重组蛋白与Cry1Ac毒素的免疫荧光定位分析 | 第63页 |
| ·Cry1Ac毒素对Sf9细胞的毒性分析 | 第63-64页 |
| 4 小结与讨论 | 第64-66页 |
| 第五章 全文总结 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-76页 |
| 致谢 | 第76-78页 |
| 作者简历 | 第78-79页 |
