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柱状黄杆菌(Flavobacterium columnare)菌蜕疫苗的研究

中文摘要第1-12页
英文摘要第12-16页
符号与缩略词表第16-17页
文献综述第17-43页
 第一章 鱼类柱形病与柱状黄杆菌第17-29页
  1 柱形病与病原第17-18页
  2 柱状黄杆菌的命名第18页
  3 柱状黄杆菌的生物学特性第18-22页
   ·分离与培养第18-19页
   ·诊断与鉴定第19-20页
   ·宿主与血清型第20-21页
   ·病原性与感染第21-22页
  4 柱状黄杆菌的遗传多样性第22-24页
  5 柱形病的预防对策第24-29页
   ·化学药物或消毒剂防治第24-25页
   ·抗生素防治第25页
   ·生态防治和抗病育种第25-26页
   ·疫苗免疫防治第26-29页
 第二章 细菌菌蜕平台系统的研究进展第29-43页
  1 细菌菌蜕的形成机制第29-34页
   ·噬菌体 PhiX174 E 蛋白的裂解功能第29-31页
   ·特异性跨膜孔道的形成过程第31-33页
   ·裂解基因 E 的限制性表达第33-34页
  2 菌蜕生产的质量监控第34-35页
  3 细菌菌蜕的应用第35-40页
   ·菌蜕作为疫苗第35-37页
   ·菌蜕作为递呈异源抗原的载体第37-39页
   ·菌蜕作为 DNA 疫苗和药物的递送载体第39-40页
  4 鱼类致病菌菌蜕的研究第40-42页
   ·迟缓爱德华菌菌蜕第41页
   ·嗜水气单胞菌菌蜕第41-42页
   ·鳗弧菌菌蜕第42页
  5 展望第42-43页
实验研究第43-175页
 第三章 柱状黄杆菌的生物学特性研究第43-69页
  1 材料和方法第44-55页
   ·菌株第44页
   ·F. columnare G4R3 的复苏与培养第44-45页
   ·F. columnare G4R3 菌落与菌体特征观察第45-46页
   ·F. columnare G4R3 常规生化鉴定第46-47页
   ·F. columnare G4R3 生长曲线的测定第47-48页
   ·F. columnare G4R3 对抗生素药物的敏感性第48-49页
   ·16S rDNA 的 PCR 扩增鉴定第49-53页
   ·半致死浓度 LD_50的测定与草鱼人工感染试验第53-55页
  2 结果第55-65页
   ·F. columnare G4R3 的形态特征第55-56页
   ·常规生化特征第56-57页
   ·生长曲线的建立第57-58页
   ·对抗生素的敏感性第58-60页
   ·16S rDNA 的分子鉴定第60-62页
   ·对草鱼腹腔注射半致死浓度 LD_50的测定第62-63页
   ·菌株 F. columnare G4R3 对草鱼的致病作用第63-65页
  3 讨论第65-69页
 第四章 柱状黄杆菌裂解质粒的构建第69-114页
  1 材料与仪器第70-72页
   ·菌株和质粒第70页
   ·主要实验仪器第70-71页
   ·试剂盒与工具酶第71页
   ·相关试剂第71-72页
  2 实验方法第72-88页
   ·质粒 pMD18T-geneE 的构建第72-75页
   ·温控裂解质粒 pBV-geneE 的构建第75-77页
   ·温控裂解质粒 pBV-geneE-cat 的构建第77-80页
   ·温控裂解质粒 pBV-geneE-Fpro-cat 的构建第80-85页
   ·geneE 融合蛋白表达质粒 pET28a-geneE 的构建第85-87页
   ·geneE 融合蛋白表达质粒 pET32a-geneE 的构建第87页
   ·geneE 融合蛋白表达质粒 pET28a-geneE-cat 的构建第87-88页
   ·geneE 融合蛋白表达质粒 pET32a-geneE-cat 的构建第88页
  3 实验结果第88-110页
   ·质粒 pMD18T-geneE 的构建第88-91页
   ·温控裂解质粒 pBV-geneE 的构建第91-93页
   ·温控裂解质粒 pBV-geneE-cat 的构建第93-98页
   ·温控裂解质粒 pBV-geneE-Fpro-cat 的构建第98-104页
   ·geneE 融合蛋白表达质粒 pET28a-geneE,pET32a-geneE 的构建第104-105页
   ·geneE 融合蛋白表达质粒 pET28a-geneE-cat,pET32a-geneE-cat 的构建第105-110页
  4 讨论第110-114页
 第五章 柱状黄杆菌限制性遗传屏障与内源性质粒第114-155页
  1 材料与方法第115-125页
   ·菌株、质粒与主要试剂第115页
   ·F. columnare G4R3 基因组 DNA 的提取第115-116页
   ·F. columnare G4R3 的 DNA 核酸酶活性研究第116-118页
   ·F. columnare G4R3 内源性质粒的研究第118-123页
   ·F. columnare G4R3 衍生菌株 F. columnare G4R3M 的筛选第123-125页
  2 实验结果第125-149页
   ·F. columnare G4R3 基因组 DNA 的提取第125页
   ·F. columnare G4R3 的 DNA 核酸酶活性第125-127页
   ·F. columnare G4R3 内源性质粒 FcG4P第127-137页
   ·F. columnare G4R3 质粒 FcG4P 的去除第137-149页
   ·F. columnare G4R3 衍生菌株 F. columnare G4R3M 的筛选第149页
  3 讨论第149-155页
 第六章 柱状黄杆菌菌蜕的制备第155-165页
  1 材料与方法第155-159页
   ·菌株与质粒第155-156页
   ·培养基与主要试剂和仪器第156页
   ·裂解质粒 pBV-geneE-Fpro-cat 的转化第156-157页
   ·裂解基因 E 的诱导表达第157页
   ·柱状黄杆菌菌蜕基因组 DNA 的制备和电泳分析第157-159页
   ·柱状黄杆菌菌蜕的扫描电镜和透射电镜观察第159页
  2 实验结果第159-162页
   ·柱状黄杆菌衍生菌株 G4R3M22 菌蜕的形成第159-161页
   ·柱状黄杆菌衍生菌株 G4R3M22 菌蜕中遗传物质的电泳分析第161页
   ·柱状黄杆菌衍生菌株 G4R3M22 菌蜕的电镜观察第161-162页
  3 讨论第162-165页
 第七章 柱状黄杆菌菌蜕疫苗的免疫效力评价第165-175页
  1 材料与方法第166-169页
   ·主要试剂与仪器第166页
   ·试验动物及饲养条件第166页
   ·柱状黄杆菌菌蜕疫苗的制备第166-167页
   ·柱状黄杆菌甲醛灭活疫苗的制备第167页
   ·注射免疫试验第167页
   ·血清凝集效价的测定第167-168页
   ·血清杀菌活性分析第168-169页
   ·攻毒试验第169页
   ·统计分析第169页
  2 实验结果第169-173页
   ·柱状黄杆菌菌蜕疫苗和甲醛灭活苗的活菌检测第169-170页
   ·草鱼血清凝集反应及凝集效价的动态变化第170-171页
   ·血清杀菌活性的分析第171页
   ·草鱼攻毒后的免疫保护诱导第171-173页
  3 讨论第173-175页
结论第175-176页
参考文献第176-191页
攻读学位期间发表的学术论著第191-193页
致谢第193页

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