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致急性纤维肉瘤的缺陷型J亚群禽白血病病毒肿瘤基因的鉴定

中文摘要第1-15页
Abstract第15-19页
1 前言第19-42页
   ·致瘤性反转录病毒第19-21页
   ·禽白血病/肉瘤病毒群第21-31页
     ·病毒粒子的形态结构第21页
     ·病毒粒子的理化特性第21页
     ·核酸和基因组结构第21-24页
       ·基因组基本结构第22-23页
       ·完整型和缺陷型病毒基因结构第23-24页
     ·病毒蛋白第24-26页
     ·病毒生活周期第26-29页
     ·病毒亚群分类第29页
     ·J 亚群禽白血病病毒第29-31页
   ·禽白血病/肉瘤病毒的致病型第31-32页
   ·急慢性转化型病毒与致肿瘤机制第32-41页
     ·慢性转化型病毒第32-34页
       ·淋巴细胞性白血病病毒第34页
       ·慢性髓细胞瘤病毒第34页
     ·急性转化型病毒第34-41页
       ·劳斯肉瘤病毒第36-37页
       ·骨髓细胞瘤病毒第37-38页
       ·Fujinami 肉瘤病毒第38-39页
       ·成髓细胞性白血病病毒第39页
       ·UR2 肉瘤病毒第39-41页
   ·本研究的目的及意义第41-42页
2 材料和方法第42-75页
   ·材料第42-46页
     ·病料第42页
     ·试验动物第42页
     ·主要试剂第42页
     ·载体和菌种第42-44页
     ·主要配制试剂第44-46页
     ·主要仪器第46页
   ·方法第46-75页
     ·肉瘤研磨液及其细胞传代毒的致病性试验比较第46-49页
       ·肉瘤组织滤过液的制备第46页
       ·CEF 细胞的制备第46-47页
       ·CEF 细胞传代毒的制备第47页
       ·ALV-p27 抗原检测试剂盒的使用第47-48页
       ·病毒的定量第48-49页
       ·接种动物第49页
       ·病理组织切片的制备第49页
     ·完整复制型病毒与缺陷型病毒 Fu-Js 前病毒基因组序列的扩增及测序第49-57页
       ·病毒 RNA 的提取第49-50页
       ·前病毒 DNA 的提取第50-51页
       ·引物的设计与合成第51-53页
       ·聚合酶链式反应第53页
       ·RT-PCR第53-54页
       ·PCR 产物的回收第54-55页
       ·回收产物的连接第55页
       ·感受态细胞的制备第55-56页
       ·连接产物的转化第56页
       ·阳性克隆细菌的筛选第56页
       ·质粒 DNA 的提取第56-57页
       ·重组质粒 DNA 的 PCR 鉴定第57页
       ·序列测定与分析第57页
     ·v-fps 蛋白表达、抗体制备及间接免疫荧光法、免疫组化法检测病毒抗原第57-67页
       ·v-fps 蛋白的设计第57-58页
       ·v-fps 蛋白表达引物设计第58-59页
       ·v-fps 基因表达区段的扩增及克隆鉴定第59页
       ·原核表达重组质粒 pET-32a(+)-fpsq,pET-32a(+)-fpsh 的构建第59页
       ·重组质粒的酶切鉴定第59-60页
       ·重组质粒的序列分析鉴定第60页
       ·重组质粒的诱导表达第60页
       ·SDS-PAGE 蛋白质电泳分析第60-62页
       ·重组蛋白的大量表达第62-63页
       ·重组蛋白的纯化第63页
       ·重组蛋白的复性第63-64页
       ·蛋白浓度的测定第64页
       ·免疫 Balb/c 小鼠第64页
       ·间接 ELISA 检测方法的建立及判定标准第64-65页
       ·间接 ELISA 检测小鼠免疫后的抗体水平第65页
       ·感染 CEF 细胞的培养第65页
       ·间接免疫荧光试验第65-66页
       ·石蜡切片的制备第66页
       ·免疫组织化学染色方法的建立第66-67页
     ·Fu-J1 与 Fu-J3 前病毒 cDNA 克隆的构建及分子克隆化病毒的拯救第67-75页
       ·前病毒 cDNA 克隆的构建策略第67-69页
       ·前病毒 cDNA 克隆的构建步骤第69-70页
       ·pTZ57-Fu-J1 的改造策略第70-73页
       ·质粒 pTZ57-Fu-J1 改造的鉴定第73页
       ·质粒的转染第73-74页
       ·分子克隆化病毒的拯救第74页
       ·质粒 DNA 接种 SPF 鸡第74-75页
3 结果与分析第75-99页
   ·肉瘤研磨液及其细胞传代毒的致病性试验比较第75-77页
     ·各组病毒的定量第75页
     ·细胞病变效应的观察第75页
     ·致病性试验第75-76页
     ·剖检及病理组织切片观察第76-77页
   ·完整复制型病毒 SD1005 与缺陷型病毒 Fu-Js 前病毒基因组序列的分析第77-89页
     ·SD1005 前病毒 cDNA 全基因组核苷酸序列及分析第77-80页
     ·缺陷型 J 亚群病毒(Fu-Js)基因组核苷酸的扩增及序列分析第80-89页
       ·携带有肿瘤基因的病毒嵌合体分子核酸片段的扩增第80页
       ·缺陷型 J 亚群病毒(Fu-Js)基因组结构的解析第80-82页
       ·Fu-Js 与 Fujinami 病毒、PRCII 病毒的序列比对第82-87页
       ·Fu-Js 与 SD1005 的序列比对第87-89页
   ·v-fps 蛋白的表达、抗体的制备及间接免疫荧光法、免疫组化法检测病毒抗原第89-94页
     ·原核表达重组质粒 pET-32a(+)-fpsq,pET-32a(+)-fpsh 的鉴定第89页
     ·v-fpsq 及 v-fpsh 蛋白的诱导表达及 SDS-PAGE 检测第89-91页
     ·间接 ELISA 方法检测小鼠抗体水平及其效价第91-92页
     ·抗 v-fps 血清对急性致瘤病毒感染的 CEF 的鉴定第92-93页
     ·免疫组化法检测纤维肉瘤组织中病毒抗原第93-94页
   ·Fu-J1 与 Fu-J3 前病毒 cDNA 克隆的构建及分子克隆化病毒的拯救第94-99页
     ·Fu-J1 与 Fu-J3 前病毒 cDNA 克隆的获得第94-96页
     ·pTZ57-Fu-J1 的改造及鉴定第96页
     ·质粒的转染效果第96-97页
     ·分子克隆化病毒的拯救第97页
     ·DNA 接种试验第97-99页
4 讨论第99-103页
5 结论第103-105页
6 参考文献第105-126页
7 附录第126-139页
   ·SD1005 前病毒全基因组 cDNA 的核苷酸序列第126-131页
   ·缺陷型病毒 Fu-J1 前病毒全基因组 cDNA 的核苷酸序列第131-135页
   ·缺陷型病毒 Fu-J3 前病毒全基因组 cDNA 的核苷酸序列第135-139页
8 致谢第139-140页
9 攻读学位期间发表论文情况第140页

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