中文摘要 | 第1-15页 |
Abstract | 第15-19页 |
1 前言 | 第19-42页 |
·致瘤性反转录病毒 | 第19-21页 |
·禽白血病/肉瘤病毒群 | 第21-31页 |
·病毒粒子的形态结构 | 第21页 |
·病毒粒子的理化特性 | 第21页 |
·核酸和基因组结构 | 第21-24页 |
·基因组基本结构 | 第22-23页 |
·完整型和缺陷型病毒基因结构 | 第23-24页 |
·病毒蛋白 | 第24-26页 |
·病毒生活周期 | 第26-29页 |
·病毒亚群分类 | 第29页 |
·J 亚群禽白血病病毒 | 第29-31页 |
·禽白血病/肉瘤病毒的致病型 | 第31-32页 |
·急慢性转化型病毒与致肿瘤机制 | 第32-41页 |
·慢性转化型病毒 | 第32-34页 |
·淋巴细胞性白血病病毒 | 第34页 |
·慢性髓细胞瘤病毒 | 第34页 |
·急性转化型病毒 | 第34-41页 |
·劳斯肉瘤病毒 | 第36-37页 |
·骨髓细胞瘤病毒 | 第37-38页 |
·Fujinami 肉瘤病毒 | 第38-39页 |
·成髓细胞性白血病病毒 | 第39页 |
·UR2 肉瘤病毒 | 第39-41页 |
·本研究的目的及意义 | 第41-42页 |
2 材料和方法 | 第42-75页 |
·材料 | 第42-46页 |
·病料 | 第42页 |
·试验动物 | 第42页 |
·主要试剂 | 第42页 |
·载体和菌种 | 第42-44页 |
·主要配制试剂 | 第44-46页 |
·主要仪器 | 第46页 |
·方法 | 第46-75页 |
·肉瘤研磨液及其细胞传代毒的致病性试验比较 | 第46-49页 |
·肉瘤组织滤过液的制备 | 第46页 |
·CEF 细胞的制备 | 第46-47页 |
·CEF 细胞传代毒的制备 | 第47页 |
·ALV-p27 抗原检测试剂盒的使用 | 第47-48页 |
·病毒的定量 | 第48-49页 |
·接种动物 | 第49页 |
·病理组织切片的制备 | 第49页 |
·完整复制型病毒与缺陷型病毒 Fu-Js 前病毒基因组序列的扩增及测序 | 第49-57页 |
·病毒 RNA 的提取 | 第49-50页 |
·前病毒 DNA 的提取 | 第50-51页 |
·引物的设计与合成 | 第51-53页 |
·聚合酶链式反应 | 第53页 |
·RT-PCR | 第53-54页 |
·PCR 产物的回收 | 第54-55页 |
·回收产物的连接 | 第55页 |
·感受态细胞的制备 | 第55-56页 |
·连接产物的转化 | 第56页 |
·阳性克隆细菌的筛选 | 第56页 |
·质粒 DNA 的提取 | 第56-57页 |
·重组质粒 DNA 的 PCR 鉴定 | 第57页 |
·序列测定与分析 | 第57页 |
·v-fps 蛋白表达、抗体制备及间接免疫荧光法、免疫组化法检测病毒抗原 | 第57-67页 |
·v-fps 蛋白的设计 | 第57-58页 |
·v-fps 蛋白表达引物设计 | 第58-59页 |
·v-fps 基因表达区段的扩增及克隆鉴定 | 第59页 |
·原核表达重组质粒 pET-32a(+)-fpsq,pET-32a(+)-fpsh 的构建 | 第59页 |
·重组质粒的酶切鉴定 | 第59-60页 |
·重组质粒的序列分析鉴定 | 第60页 |
·重组质粒的诱导表达 | 第60页 |
·SDS-PAGE 蛋白质电泳分析 | 第60-62页 |
·重组蛋白的大量表达 | 第62-63页 |
·重组蛋白的纯化 | 第63页 |
·重组蛋白的复性 | 第63-64页 |
·蛋白浓度的测定 | 第64页 |
·免疫 Balb/c 小鼠 | 第64页 |
·间接 ELISA 检测方法的建立及判定标准 | 第64-65页 |
·间接 ELISA 检测小鼠免疫后的抗体水平 | 第65页 |
·感染 CEF 细胞的培养 | 第65页 |
·间接免疫荧光试验 | 第65-66页 |
·石蜡切片的制备 | 第66页 |
·免疫组织化学染色方法的建立 | 第66-67页 |
·Fu-J1 与 Fu-J3 前病毒 cDNA 克隆的构建及分子克隆化病毒的拯救 | 第67-75页 |
·前病毒 cDNA 克隆的构建策略 | 第67-69页 |
·前病毒 cDNA 克隆的构建步骤 | 第69-70页 |
·pTZ57-Fu-J1 的改造策略 | 第70-73页 |
·质粒 pTZ57-Fu-J1 改造的鉴定 | 第73页 |
·质粒的转染 | 第73-74页 |
·分子克隆化病毒的拯救 | 第74页 |
·质粒 DNA 接种 SPF 鸡 | 第74-75页 |
3 结果与分析 | 第75-99页 |
·肉瘤研磨液及其细胞传代毒的致病性试验比较 | 第75-77页 |
·各组病毒的定量 | 第75页 |
·细胞病变效应的观察 | 第75页 |
·致病性试验 | 第75-76页 |
·剖检及病理组织切片观察 | 第76-77页 |
·完整复制型病毒 SD1005 与缺陷型病毒 Fu-Js 前病毒基因组序列的分析 | 第77-89页 |
·SD1005 前病毒 cDNA 全基因组核苷酸序列及分析 | 第77-80页 |
·缺陷型 J 亚群病毒(Fu-Js)基因组核苷酸的扩增及序列分析 | 第80-89页 |
·携带有肿瘤基因的病毒嵌合体分子核酸片段的扩增 | 第80页 |
·缺陷型 J 亚群病毒(Fu-Js)基因组结构的解析 | 第80-82页 |
·Fu-Js 与 Fujinami 病毒、PRCII 病毒的序列比对 | 第82-87页 |
·Fu-Js 与 SD1005 的序列比对 | 第87-89页 |
·v-fps 蛋白的表达、抗体的制备及间接免疫荧光法、免疫组化法检测病毒抗原 | 第89-94页 |
·原核表达重组质粒 pET-32a(+)-fpsq,pET-32a(+)-fpsh 的鉴定 | 第89页 |
·v-fpsq 及 v-fpsh 蛋白的诱导表达及 SDS-PAGE 检测 | 第89-91页 |
·间接 ELISA 方法检测小鼠抗体水平及其效价 | 第91-92页 |
·抗 v-fps 血清对急性致瘤病毒感染的 CEF 的鉴定 | 第92-93页 |
·免疫组化法检测纤维肉瘤组织中病毒抗原 | 第93-94页 |
·Fu-J1 与 Fu-J3 前病毒 cDNA 克隆的构建及分子克隆化病毒的拯救 | 第94-99页 |
·Fu-J1 与 Fu-J3 前病毒 cDNA 克隆的获得 | 第94-96页 |
·pTZ57-Fu-J1 的改造及鉴定 | 第96页 |
·质粒的转染效果 | 第96-97页 |
·分子克隆化病毒的拯救 | 第97页 |
·DNA 接种试验 | 第97-99页 |
4 讨论 | 第99-103页 |
5 结论 | 第103-105页 |
6 参考文献 | 第105-126页 |
7 附录 | 第126-139页 |
·SD1005 前病毒全基因组 cDNA 的核苷酸序列 | 第126-131页 |
·缺陷型病毒 Fu-J1 前病毒全基因组 cDNA 的核苷酸序列 | 第131-135页 |
·缺陷型病毒 Fu-J3 前病毒全基因组 cDNA 的核苷酸序列 | 第135-139页 |
8 致谢 | 第139-140页 |
9 攻读学位期间发表论文情况 | 第140页 |