| 表索引 | 第1-9页 |
| 图索引 | 第9-11页 |
| 中英文缩略词表 | 第11-13页 |
| 摘要 | 第13-15页 |
| Abstract | 第15-17页 |
| 前言 | 第17-26页 |
| 一、食管癌研究进展 | 第17-18页 |
| 二、miRNA研究进展 | 第18-22页 |
| 1. miRNA概述 | 第18-21页 |
| ·miRNA的发现及作用机制 | 第18-20页 |
| ·miRNA与肿瘤细胞异常增殖的关系 | 第20-21页 |
| 2. miR-29c研究进展 | 第21-22页 |
| 三、cyclin E与肿瘤 | 第22-26页 |
| 1. 细胞周期 | 第22-23页 |
| 2. cyclin E | 第23-26页 |
| ·cyclin E的结构 | 第23页 |
| ·cyclin E对细胞周期的调控 | 第23-24页 |
| ·pRb与细胞周期调控 | 第24页 |
| ·cyclin E与肿瘤的关系 | 第24-26页 |
| 实验材料 | 第26-31页 |
| 一、实验样本 | 第26页 |
| 二、主要试剂 | 第26-27页 |
| 三、溶液配制 | 第27-28页 |
| 四、主要仪器设备 | 第28-29页 |
| 五、细胞系与试验动物 | 第29页 |
| 六、菌株与质粒 | 第29-31页 |
| 实验方法 | 第31-53页 |
| 一、配对食管癌组织样本采集 | 第31页 |
| 二、细胞系 | 第31-32页 |
| 1. 细胞复苏 | 第31页 |
| 2. 细胞培养 | 第31页 |
| 3. 细胞冻存 | 第31页 |
| 4. 细胞传代 | 第31-32页 |
| 三、mRNA提取及miRNA富集 | 第32-33页 |
| 1. 细胞总RNA的提取 | 第32页 |
| 2. 细胞及组织miRNA提取 | 第32-33页 |
| 四、半定量RT-PCR检测mRNA表达水平 | 第33-35页 |
| 五、实时定量PCR(Real-time PCR) | 第35-37页 |
| 六、蛋白印记Western Blotting | 第37-41页 |
| 1. 细胞总蛋白的提取 | 第38页 |
| 2. 蛋白浓度测定 | 第38-39页 |
| 3. Western blotting步骤 | 第39-41页 |
| 七、细胞转染 | 第41页 |
| 八、细胞功能实验 | 第41-43页 |
| 1. 流式细胞仪检测细胞周期 | 第41-42页 |
| 2. 体外细胞增殖 | 第42页 |
| 3. 裸鼠致瘤实验 | 第42页 |
| 4. 流式细胞仪检测细胞凋亡 | 第42-43页 |
| 5. 细胞迁移实验 | 第43页 |
| 6. 划痕愈合实验 | 第43页 |
| 九、质粒构建 | 第43-47页 |
| 1. 报告基因载体构建 | 第43-44页 |
| 3. cyclin E ORF表达质粒 | 第44-47页 |
| 十、双荧光素酶报告基因实验 | 第47-49页 |
| 十一、cyclin E回复实验 | 第49-50页 |
| 十二、原位杂交 | 第50-51页 |
| 十三、miR-29c基因拷贝数检测 | 第51-52页 |
| 十四、统计分析方法 | 第52-53页 |
| 实验结果 | 第53-76页 |
| 一、miR-29c在ESCC组织和ESCC细胞系中表达水平 | 第53-57页 |
| 1. Real-time PCR检测组织中miR-29c水平 | 第53-55页 |
| 2. 原位杂交检测组织中miR-29c水平 | 第55页 |
| 3. Real-time PCR检测不同食管癌细胞系中miR-29c水平 | 第55-57页 |
| 二、miR-29c在食管癌中的功能研究 | 第57-65页 |
| 1. 上调食管癌细胞中miR-29c表达水平 | 第57-58页 |
| 2. miR-29c对食管癌细胞增殖的影响 | 第58-59页 |
| 3. miR-29c对食管癌细胞裸鼠致瘤的影响 | 第59-61页 |
| 4. miR-29c诱导食管癌细胞G1/S期细胞周期阻滞 | 第61-62页 |
| 5. miR-29c对食管癌细胞凋亡的影响 | 第62-63页 |
| 6. miR-29c对食管癌细胞迁移、运动能力的影响 | 第63-65页 |
| 三、miR-29c下游靶基因生物信息学预测 | 第65-66页 |
| 四、miR-29c下游靶基因生物学实验验证 | 第66-73页 |
| 1. 食管癌细胞中miR-29c与cyclin E农达呈负相关 | 第66-67页 |
| 2. miR-29c对食管癌细胞中cyclin E的农达调控 | 第67-68页 |
| 3. miR-29c与cyclin E在食管癌细胞中的量效关系 | 第68-69页 |
| 4. 双荧光报告基因实验 | 第69-71页 |
| 5. cyclin E回复实验 | 第71-72页 |
| 6. miR-29c不影响其它G1期相关蛋白的表达 | 第72-73页 |
| 7. cyclin E/cdk2-pRb信号通路 | 第73页 |
| 五、miR-29c基因拷贝数的检测 | 第73-75页 |
| 六、miR-29c与ESCC临床病理特征的分析 | 第75-76页 |
| 讨论 | 第76-88页 |
| 一、miR-29c在ESCC组织和ESCC细胞系中频繁低表达 | 第76-80页 |
| 二、miR-29c在食管癌中发挥的作用 | 第80-83页 |
| 1. miR-29c在食管癌细胞中过表达抑制细胞增殖 | 第80-83页 |
| 2. miR-29c在食管细胞中过表达抑制细胞运动能力 | 第83页 |
| 三、miR-29c下游靶基因生物信息学预测 | 第83-85页 |
| 四、miR-29c下游靶基因生物学实验验证 | 第85-86页 |
| 五、初步探索miR-29c在食管癌组织中低表达的原因 | 第86-87页 |
| 六、miR-29c与ESCC临床病理特征 | 第87页 |
| 七、miR-29c与靶向治疗 | 第87-88页 |
| 结论 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-103页 |
| 基金资助 | 第103-104页 |
| 文献综述 | 第104-127页 |
| 参考文献 | 第116-127页 |
| 致谢 | 第127-128页 |
| 个人简历 | 第128-129页 |
