| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-36页 |
| ·木霉在生物防治中的应用 | 第15-17页 |
| ·木霉菌的拮抗机制 | 第15-16页 |
| ·木霉菌的拮抗范围 | 第16-17页 |
| ·木霉制剂的种类 | 第17页 |
| ·木霉功能基因的研究 | 第17-19页 |
| ·功能基因的研究方法 | 第19-26页 |
| ·正向遗传学方法 | 第19-22页 |
| ·反向遗传学方法 | 第22-26页 |
| ·农杆菌介导丝状真菌遗传转化的研究进展 | 第26-33页 |
| ·农杆菌介导丝状真菌遗传转化的分子基础 | 第26-27页 |
| ·农杆菌介导丝状真菌遗传转化的过程 | 第27页 |
| ·影响农杆菌介导的丝状真菌遗传转化效率的因素 | 第27-29页 |
| ·农杆菌介导的丝状真菌遗传转化的特点 | 第29-30页 |
| ·农杆菌介导的丝状真菌遗传转化在真菌功能基因研究中的应用 | 第30-31页 |
| ·常用的选择性标记 | 第31-32页 |
| ·标签基因的分离方法 | 第32-33页 |
| ·本研究的目的意义及技术路线 | 第33-36页 |
| ·本研究的目的意义 | 第33页 |
| ·本研究的主要内容 | 第33-35页 |
| ·本研究的技术路线 | 第35-36页 |
| 第二章 农杆菌介导的哈茨木霉转化系统的优化 | 第36-56页 |
| ·实验材料 | 第36-39页 |
| ·菌株和质粒 | 第36-37页 |
| ·供试培养基 | 第37-38页 |
| ·引物和主要试剂 | 第38-39页 |
| ·实验菌株保存方法 | 第39页 |
| ·实验方法 | 第39-42页 |
| ·筛选转化子所需潮霉素B 浓度的确定 | 第39-40页 |
| ·抑制农杆菌生长所需头孢霉素浓度的确定 | 第40页 |
| ·农杆菌EHA105 的活化和诱导培养 | 第40页 |
| ·哈茨木霉Th-33 分生孢子的培养 | 第40页 |
| ·农杆菌转化哈茨木霉的具体步骤 | 第40页 |
| ·假定转化子的遗传稳定性分析 | 第40页 |
| ·木霉菌丝体的培养和收集 | 第40-41页 |
| ·木霉基因组DNA 的提取 | 第41-42页 |
| ·假定转化子的T-DNA 插入的PCR 检测 | 第42页 |
| ·结果与分析 | 第42-53页 |
| ·筛选转化子所需潮霉素B 浓度的确定 | 第42-44页 |
| ·抑制农杆菌生长所需头孢霉素浓度的确定 | 第44页 |
| ·农杆菌转化哈茨木霉的初步研究 | 第44-47页 |
| ·农杆菌介导的哈茨木霉转化体系的优化 | 第47-52页 |
| ·利用农杆菌进行其他木霉菌的转化 | 第52-53页 |
| ·讨论 | 第53-56页 |
| ·转化过程中存在的假阳性问题 | 第53-54页 |
| ·关于转化过程的优化 | 第54-55页 |
| ·转化受体对转化系统的要求及对转化效率的影响 | 第55-56页 |
| 第三章 哈茨木霉T-DNA 插入突变体库质量的评价 | 第56-66页 |
| ·实验材料 | 第56-57页 |
| ·供试菌株 | 第56页 |
| ·供试培养基及用途 | 第56页 |
| ·供试试剂 | 第56-57页 |
| ·实验方法 | 第57-61页 |
| ·哈茨木霉转化子的遗传稳定性分析 | 第57页 |
| ·哈茨木霉及转化子菌丝体的培养和收集 | 第57页 |
| ·哈茨木霉及转化子基因组DNA 的提取 | 第57页 |
| ·农杆菌EHA105 的培养 | 第57-58页 |
| ·农杆菌EHA105 质粒DNA 的提取 | 第58页 |
| ·DNA 质量的检测 | 第58-59页 |
| ·T-DNA 插入的PCR 检测 | 第59页 |
| ·T-DNA 插入的Southern 杂交检测 | 第59-61页 |
| ·结果与分析 | 第61-65页 |
| ·哈茨木霉转化子的遗传稳定性分析 | 第61-62页 |
| ·哈茨木霉转化子T-DNA 插入的PCR 检测 | 第62-63页 |
| ·哈茨木霉转化子T-DNA 插入的Southern 杂交检测 | 第63-65页 |
| ·讨论 | 第65-66页 |
| 第四章 哈茨木霉突变体库中不同性状突变子的筛选和评价 | 第66-81页 |
| ·实验材料 | 第66-67页 |
| ·实验菌株 | 第66页 |
| ·实验培养基 | 第66-67页 |
| ·实验方法 | 第67-69页 |
| ·哈茨木霉T-DNA 插入突变体库中孢子产生突变株的筛选 | 第67-68页 |
| ·哈茨木霉T-DNA 插入突变体库中菌落生长速度突变株的筛选 | 第68页 |
| ·哈茨木霉T-DNA 插入突变体库中拮抗能力变异突变株的筛选 | 第68-69页 |
| ·实验结果与分析 | 第69-78页 |
| ·利用PDA 培养基进行哈茨木霉孢子产生突变子的筛选 | 第69-72页 |
| ·利用CHM 培养基进行哈茨木霉孢子产生突变子的筛选 | 第72-73页 |
| ·利用PD 培养基进行哈茨木霉孢子产生突变子的筛选 | 第73-76页 |
| ·菌落生长速度变异突变子的筛选 | 第76-77页 |
| ·拮抗能力变异突变子的筛选 | 第77-78页 |
| ·讨论 | 第78-81页 |
| 第五章 T-DNA 在哈茨木霉中的整合特点及孢子产生突变子T-DNA 侧翼序列的分析 | 第81-98页 |
| ·试验材料 | 第81-82页 |
| ·TAIL-PCR 实验所需的随机简并引物和特异引物 | 第81-82页 |
| ·培养基及生化试剂 | 第82页 |
| ·实验方法 | 第82-86页 |
| ·哈茨木霉及转化子的培养和菌丝体的收集 | 第82-83页 |
| ·哈茨木霉及转化子基因组DNA 的提取 | 第83页 |
| ·DNA 质量的电泳检测 | 第83页 |
| ·hph 基因的扩增反应程序和体系 | 第83页 |
| ·TAIL-PCR 反应程序和反应体系 | 第83-84页 |
| ·不同随机引物对扩增效率的影响 | 第84页 |
| ·第一轮PCR 产物不同稀释浓度对TAIL-PCR 扩增效率的影响 | 第84页 |
| ·第二轮产物不同稀释度对TAIL-PCR 扩增效率的影响 | 第84页 |
| ·TAIL-PCR 产物的回收 | 第84-85页 |
| ·TAIL-PCR 片段的克隆 | 第85页 |
| ·T-DNA 侧翼序列的同源性比较 | 第85-86页 |
| ·结果与分析 | 第86-96页 |
| ·TAIL-PCR 体系的优化 | 第86-88页 |
| ·TAIL-PCR 实验结果分析 | 第88-91页 |
| ·孢子产生突变子T-DNA 侧翼序列的功能解析 | 第91-96页 |
| ·讨论 | 第96-98页 |
| ·关于TAIL-PCR | 第96-97页 |
| ·关于T-DNA 的插入位点 | 第97-98页 |
| 第六章 全文结论 | 第98-101页 |
| ·全文结论及创新点 | 第98-99页 |
| ·农杆菌介导的哈茨木霉转化系统的优化及T-DNA 插入突变体库的构建 | 第98页 |
| ·哈茨木霉T-DNA 插入突变体库的评价 | 第98页 |
| ·哈茨木霉孢子产生突变子的筛选 | 第98-99页 |
| ·哈茨木霉生长及拮抗突变子的筛选 | 第99页 |
| ·哈茨木霉T-DNA 插入侧翼序列分析 | 第99页 |
| ·孢子产生突变子相关基因的克隆 | 第99页 |
| ·有待进一步研究的问题 | 第99-101页 |
| 参考文献 | 第101-111页 |
| 附录 论文涉及的序列比对结果 | 第111-117页 |
| 致谢 | 第117-118页 |
| 作者简历 | 第118页 |
