| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 第一章 研究动态和研究意义 | 第13-25页 |
| 1.前言 | 第13-25页 |
| ·白细胞介素L8 | 第13-14页 |
| ·IL-18的分子结构 | 第14-15页 |
| ·IL-18的受体 | 第15-16页 |
| ·IL-18Rα | 第16页 |
| ·IL-18Rβ | 第16页 |
| ·IL-18BP | 第16页 |
| ·IL-18的信号转导 | 第16-18页 |
| ·IL-18的生物学特性 | 第18-20页 |
| ·IL-18促进Th1细胞增殖 | 第18-19页 |
| ·IL-18培促进FasL介导的Th1细胞的细胞毒作用 | 第19页 |
| ·IL-18对NK细胞的作用 | 第19页 |
| ·参与细胞因子的生成 | 第19-20页 |
| ·IL-18与疾病之间的关系 | 第20-24页 |
| ·IL-18与肿瘤疾病 | 第20-21页 |
| ·IL-18与自身免疫性疾病 | 第21-22页 |
| ·IL-18与感染性疾病 | 第22-23页 |
| ·与代谢综合征 | 第23-24页 |
| ·与过敏性的疾病 | 第24页 |
| ·与损伤后脓毒症 | 第24页 |
| ·白介素18结合蛋白IL-18BP | 第24-25页 |
| 2.实验目的和意义 | 第25页 |
| 第二章 材料、预测与设计 | 第25-35页 |
| 1.材料和设备 | 第25-29页 |
| ·试剂(见表1) | 第25页 |
| ·试剂盒 | 第25页 |
| ·实验用质粒 | 第25-26页 |
| ·试验用模板 | 第26-27页 |
| ·其他材料 | 第27页 |
| ·实验仪器(见表2) | 第27-29页 |
| 2.实验设计 | 第29-35页 |
| ·实验流程 | 第29-30页 |
| ·IL-18 | 第30-32页 |
| ·通过ProtParam得出IL-18蛋白的一些数据 | 第30-31页 |
| ·PET28a-IL-18和Pgex-6p-1-IL-18 | 第31-32页 |
| ·IL-18BP | 第32-35页 |
| ·通过ProtParam得出IL-18BP蛋白的一些数据 | 第33-34页 |
| ·PET28a-Sp-I-IL-18BPPgex-6p-1-IL-18BP | 第34-35页 |
| ·各重组蛋白实际大小(见表6) | 第35页 |
| 第三章 实验方法 | 第35-46页 |
| 1.PCR扩增 | 第35-36页 |
| ·处理引物和模板 | 第35页 |
| ·PCR扩增体系 | 第35页 |
| ·琼脂糖电泳实验方法 | 第35-36页 |
| ·回收PCR产物实验方法 | 第36页 |
| 2.质粒提取 | 第36-38页 |
| ·实验方法 | 第36-38页 |
| 3.PCR产物和质粒的酶切 | 第38页 |
| ·实验体系 | 第38页 |
| ·实验方法 | 第38页 |
| 4 连接 | 第38-40页 |
| ·连接体系(见表12) | 第38-39页 |
| ·实验方法 | 第39页 |
| ·感受态细胞的制作实验方法和材料(见表13) | 第39-40页 |
| 5.转化和克隆 | 第40-41页 |
| ·反应体系(见表14) | 第40页 |
| ·转化和克隆实验方法 | 第40-41页 |
| 6.SDS-PAGE电泳 | 第41-42页 |
| ·SDS-PA6E电泳胶的配制 | 第41页 |
| ·染色与脱色 | 第41-42页 |
| 7.诱导表达 | 第42-44页 |
| ·实验方法 | 第42-43页 |
| ·融合蛋白诱导条件确定的实验方法 | 第43-44页 |
| 8.PCR结果的逆向验证 | 第44页 |
| 9.纯化 | 第44-45页 |
| ·实验方法 | 第44-45页 |
| ·纯化原理 | 第45页 |
| ·纯化条件摸索方法 | 第45页 |
| 10 蛋白的浓缩 | 第45-46页 |
| ·浓缩方法:超滤法 | 第45页 |
| ·实验方法 | 第45-46页 |
| 11.蛋白的层析和浓度计算 | 第46页 |
| ·实验方法 | 第46页 |
| ·计算蛋白浓度和质量计算公式 | 第46页 |
| 第四章 结果与讨论 | 第46-63页 |
| 1.PCR扩增结果(见图11)和回收结果(见图12)和讨论 | 第46-47页 |
| 2.质粒提取结果(见图13)和回收后的检测(见图14)及讨论 | 第47-48页 |
| 3.酶切结果(见图15、16)及讨论 | 第48-49页 |
| 4.诱导表达的结果(见图17-20)及讨论 | 第49-51页 |
| 5.PCR结果的逆向验证结果(见图21) | 第51页 |
| 6.融合蛋白纯化最佳诱导条件摸索结果(图22-33)及讨论 | 第51-55页 |
| 7.纯化条件摸索结果及分析 | 第55-57页 |
| 8.纯化结果 | 第57-58页 |
| 9.层析结果及讨论 | 第58-63页 |
| ·(PET28A-)IL-18及其浓度(见图42) | 第58页 |
| ·(PET28A-)IL-18BP及其浓度(见图44) | 第58页 |
| ·(PGEX-6P-1-)IL-18及其浓度(见圈46) | 第58页 |
| ·(PGEX-6P-1-)IL-18BP及其浓度(见图48) | 第58-63页 |
| 第五章 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-72页 |
| 附录 实验试剂配制单 | 第72-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
