| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 1 引言 | 第10-18页 |
| ·VIPs类型及杀虫活性 | 第10-13页 |
| ·Vip1A和Vip2A | 第11页 |
| ·Vip3A | 第11-13页 |
| ·Vip3A基因的鉴定 | 第13页 |
| ·Vip3A基因的分布 | 第13页 |
| ·已克隆的Vip3基因 | 第13页 |
| ·美国白蛾和杨扇舟蛾的研究进展 | 第13-14页 |
| ·美国白蛾的生活史及发生规律 | 第13-14页 |
| ·杨扇舟蛾的生活史及发生规律 | 第14页 |
| ·杨树抗虫基因工程育种研究进展 | 第14-15页 |
| ·农杆菌介导的植物遗传转化机理 | 第14页 |
| ·杨树抗虫基因转化的研究 | 第14-15页 |
| ·杨树抗虫基因工程育种中存在的问题 | 第15-17页 |
| ·最佳外植体再生体系的建立 | 第15-16页 |
| ·遗传转化技术中存在的问题 | 第16页 |
| ·转基因杨树的稳定表达 | 第16页 |
| ·转基因杨树的安全性 | 第16-17页 |
| ·问题与展望 | 第17页 |
| ·目的与意义 | 第17-18页 |
| 2 实验材料与方法 | 第18-30页 |
| ·实验材料 | 第18-21页 |
| ·供试菌株与质粒 | 第18页 |
| ·培养基配制 | 第18-19页 |
| ·试剂 | 第19-20页 |
| ·室内生物活性测定试虫 | 第20页 |
| ·仪器设备 | 第20-21页 |
| ·研究方法 | 第21-30页 |
| ·目的蛋白Vip3A在大肠杆菌中的诱导表达检测 | 第21页 |
| ·表达产物的检测 | 第21页 |
| ·重组菌表达特性研究 | 第21页 |
| ·表达蛋白的大量提取 | 第21-22页 |
| ·表达产物的活性测定 | 第22页 |
| ·引物设计 | 第22页 |
| ·大肠杆菌质粒的提取 | 第22-23页 |
| ·PCR反应 | 第23页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第23页 |
| ·琼脂糖凝胶中DNA片段的回收(TIANGEN离心柱型试剂盒) | 第23-24页 |
| ·酶切分析 | 第24页 |
| ·平端化反应 | 第24-25页 |
| ·去磷酸化反应 | 第25页 |
| ·连接反应 | 第25页 |
| ·E.coli感受态细胞制备 | 第25页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第25-26页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第26页 |
| ·碱裂解法少量提取质粒DNA | 第26页 |
| ·碱裂解法大量提取质粒DNA | 第26页 |
| ·农杆菌转化雄性毛白杨-D | 第26-28页 |
| ·植物组织基因组DNA的提取 | 第28页 |
| ·植物基因组DNA的PCR扩增 | 第28-30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-39页 |
| ·vip3A-LS1和vip3A-LS8基因在大肠杆菌中的表达 | 第30-32页 |
| ·Vip3A-LS1蛋白的表达 | 第30-31页 |
| ·Vip3A-LS8蛋白的表达 | 第31-32页 |
| ·Vip3A-LS1和Vip3A-LS8蛋白的生物活性初步测定 | 第32-34页 |
| ·Vip3A-LS1蛋白对美国白蛾的活性 | 第32页 |
| ·Vip3A-LS1蛋白对杨扇舟蛾的活性 | 第32-33页 |
| ·Vip3A-LS8蛋白对美国白蛾的活性 | 第33页 |
| ·Vip3A-LS8蛋白对杨扇舟蛾的活性 | 第33-34页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第34-37页 |
| ·表达载体pPI113和pPI116的构建 | 第34-36页 |
| ·植物表达载体p1302PI113和p1302PI116的构建 | 第36-37页 |
| ·植物表达载体通过农杆菌介导法转化毛白杨雄株-D | 第37-39页 |
| ·植物表达载体转化农杆菌LBA4404 | 第37页 |
| ·农杆菌介导的毛白杨转化 | 第37页 |
| ·选择压及抗生素浓度的确定 | 第37-38页 |
| ·转基因毛白杨的分子生物学检测 | 第38-39页 |
| 4 讨论 | 第39-40页 |
| 5 结论 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-46页 |
| 在读期间发表论文 | 第46-47页 |
| 作者简历 | 第47-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 附件 | 第49-54页 |
