小鼠精原干细胞分离、纯化、冷冻、培养、移植及其体内介导转基因的研究
| 中文摘要 | 第1-10页 |
| 英文摘要 | 第10-12页 |
| 缩略语表 | 第12-13页 |
| 文献综述部分 | 第13-29页 |
| 第一章 精原干细胞基本特性和研究进展 | 第13-29页 |
| 1 精原干细胞基本特性 | 第13-16页 |
| ·精原干细胞的来源 | 第13-14页 |
| ·精原干细胞的自我增殖和分化 | 第14-16页 |
| ·精原干细胞的生物学特性 | 第16页 |
| 2 精原干细胞研究进展 | 第16-29页 |
| ·精原干细胞分离和纯化 | 第16-17页 |
| ·精原干细胞培养 | 第17-19页 |
| ·精原干细胞鉴定 | 第19-20页 |
| ·精原干细胞基因修饰 | 第20页 |
| ·精原干细胞冷冻保存 | 第20-21页 |
| ·精原干细胞移植 | 第21-25页 |
| ·精原干细胞介导转基因技术 | 第25-27页 |
| ·精原干细胞应用前景 | 第27-29页 |
| 试验研究部分 | 第29-56页 |
| 第二章 小鼠精原干细胞的分离和纯化 | 第29-36页 |
| 1 材料 | 第29-30页 |
| ·试验动物 | 第29页 |
| ·主要试剂 | 第29页 |
| ·主要仪器及设备 | 第29-30页 |
| ·主要试剂配方 | 第30页 |
| 2 方法 | 第30-32页 |
| ·小鼠睾丸生殖细胞悬液的制备 | 第30-31页 |
| ·小鼠精原干细胞纯化 | 第31-32页 |
| ·细胞差速贴壁法 | 第31页 |
| ·Percoll不连续密度梯度离心法 | 第31-32页 |
| ·细胞的洗涤及计数 | 第32页 |
| ·细胞接种培养 | 第32页 |
| ·细胞的纯度评估 | 第32页 |
| ·精原干细胞鉴定 | 第32页 |
| ·数据统计 | 第32页 |
| 3 结果 | 第32-33页 |
| ·精原干细胞特性 | 第32-33页 |
| ·生精细胞在Percoll梯度中的分布 | 第33页 |
| ·精原干细胞的分离纯度 | 第33页 |
| 4 讨论 | 第33-36页 |
| ·小鼠日龄对精原干细胞分离的影响 | 第33-34页 |
| ·消化方法对精原干细胞分离的影响 | 第34页 |
| ·Percoll不连续密度梯度的纯化效果 | 第34页 |
| ·精原干细胞的细胞化学特性 | 第34-36页 |
| 第三章 小鼠精原干细胞冷冻、培养和移植 | 第36-45页 |
| 1 材料 | 第36-37页 |
| ·试验动物 | 第36页 |
| ·主要试剂 | 第36页 |
| ·主要试剂配方 | 第36-37页 |
| 2 方法 | 第37-39页 |
| ·小鼠精原干细胞分离 | 第37页 |
| ·小鼠精原干细胞纯化 | 第37页 |
| ·小鼠精原干细胞冷冻和解冻 | 第37页 |
| ·小鼠精原干细胞活率检测 | 第37页 |
| ·小鼠精原干细胞增殖检测 | 第37-38页 |
| ·小鼠精原干细胞鉴定 | 第38页 |
| ·白消安诱导小鼠无精子症模型 | 第38页 |
| ·小鼠精原干细胞移植 | 第38页 |
| ·数据统计 | 第38-39页 |
| 3 结果 | 第39-42页 |
| ·降温速率对细胞复苏率影响 | 第39页 |
| ·冷冻保护剂的作用 | 第39页 |
| ·精原干细胞增殖活性 | 第39-40页 |
| ·精原干细胞鉴定 | 第40-41页 |
| ·白消安消除内源性生精细胞 | 第41-42页 |
| ·精原干细胞移植结果 | 第42页 |
| 4 讨论 | 第42-45页 |
| ·降温速率对精原干细胞冷冻保存的影响 | 第42页 |
| ·冷冻保护剂对精原干细胞冷冻保存的影响 | 第42-43页 |
| ·生长因子对精原干细胞增殖的作用 | 第43页 |
| ·精原干细胞分子生物学特征 | 第43页 |
| ·精原干细胞移植 | 第43-45页 |
| 第四章 睾丸网注射法生产转基因小鼠 | 第45-56页 |
| 1 材料 | 第45-46页 |
| ·试验动物 | 第45页 |
| ·主要试剂 | 第45页 |
| ·主要仪器 | 第45-46页 |
| 2 方法 | 第46-51页 |
| ·pEGFP-N1质粒制备 | 第46-48页 |
| ·转染液制备 | 第48页 |
| ·睾丸网注射法 | 第48-49页 |
| ·仔鼠尾尖组织DNA提取 | 第49页 |
| ·DNA纯度的检测 | 第49页 |
| ·转基因仔鼠PCR检测 | 第49-50页 |
| ·转基因点杂交检测 | 第50-51页 |
| 3 结果 | 第51-54页 |
| ·质粒制备 | 第51-53页 |
| ·转染液在生精小管中的流动规律及分布 | 第53页 |
| ·雄鼠的交配和受精能力 | 第53页 |
| ·转基因鼠PCR鉴定 | 第53-54页 |
| ·转基因鼠的点杂交分析 | 第54页 |
| 4 讨论 | 第54-56页 |
| ·小鼠睾丸网注射的有效方法 | 第54页 |
| ·生产转基因动物效率较低原因 | 第54页 |
| ·应用前景 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-65页 |
| 全文结论 | 第65-66页 |
| 图版 | 第66-70页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
