| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 前言 | 第11-23页 |
| ·磷脂的分布、种类及结构 | 第11页 |
| ·磷脂酶的种类及作用 | 第11-13页 |
| ·磷脂酶C的分子结构及类型 | 第13-14页 |
| ·原核生物中的磷脂酶C—外源性磷脂酶C(胞外磷脂酶C) | 第13-14页 |
| ·真核生物中的磷脂酶C—内源性磷脂酶C(胞内磷脂酶C) | 第14页 |
| ·磷脂酶C活化机制 | 第14-15页 |
| ·通过G蛋白偶联受体活化PLC-β同功酶 | 第14页 |
| ·通过酪氨酸激酶相关连受体活化PLC-γ同功酶 | 第14页 |
| ·PLC-δ同功酶的调节机制 | 第14-15页 |
| ·磷脂酶C的作用机理 | 第15页 |
| ·PLC的水解作用 | 第15页 |
| ·磷脂酶C的偶联作用 | 第15页 |
| ·磷脂酶C的检测方法 | 第15-18页 |
| ·卵黄平板法 | 第16页 |
| ·NPPC法 | 第16页 |
| ·定磷法 | 第16页 |
| ·滴定法 | 第16-17页 |
| ·比浊法 | 第17页 |
| ·荧光法 | 第17页 |
| ·放射性标记法 | 第17页 |
| ·免疫法 | 第17-18页 |
| ·微生物磷脂酶C的国内外研究现状 | 第18-20页 |
| ·国外研究现状 | 第18-19页 |
| ·国内研究现状 | 第19-20页 |
| ·论文研究的背景及前期工作基础 | 第20页 |
| ·研究背景 | 第20页 |
| ·前期工作基础 | 第20页 |
| ·本论文研究的内容、采用的各种研究方法及预期的研究结果 | 第20-21页 |
| ·研究内容 | 第20页 |
| ·主要方法 | 第20-21页 |
| ·预期实验结果 | 第21页 |
| ·论文研究的创新性和先进性 | 第21页 |
| ·创新性 | 第21页 |
| ·先进性 | 第21页 |
| ·项目研究的目的和意义 | 第21-23页 |
| ·目的 | 第21-22页 |
| ·意义 | 第22-23页 |
| 材料与方法 | 第23-38页 |
| ·供试材料 | 第23-28页 |
| ·土壤样品 | 第23页 |
| ·对照菌株 | 第23页 |
| ·培养基 | 第23-25页 |
| ·供试质粒 | 第25-26页 |
| ·供试抗生素 | 第26页 |
| ·实验试剂 | 第26-27页 |
| ·试剂盒和酶 | 第27-28页 |
| ·磷脂酶C样品 | 第28页 |
| ·实验动物 | 第28页 |
| ·主要仪器 | 第28页 |
| ·菌株分离及初步筛选 | 第28-30页 |
| ·采样 | 第28页 |
| ·样品编号 | 第28页 |
| ·卵黄平板法检测PLC酶活 | 第28-29页 |
| ·菌株初筛 | 第29页 |
| ·菌株的复筛 | 第29页 |
| ·菌株生物量 | 第29页 |
| ·PLC酶活力NPPC法定量测定 | 第29-30页 |
| ·血小板样品制备 | 第30页 |
| ·血小板聚集率测定 | 第30页 |
| ·菌株的分类与鉴定 | 第30-34页 |
| ·菌体的培养 | 第30页 |
| ·菌株的形态学特征 | 第30页 |
| ·个体形态学观察 | 第30页 |
| ·群体形态学观察 | 第30页 |
| ·生理生化特征的鉴定 | 第30-31页 |
| ·四个菌株16S rDNA的序列测定 | 第31-34页 |
| ·染色体DNA的分离 | 第31页 |
| ·四个菌株16S rDNA片段的PCR扩增 | 第31-32页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第32页 |
| ·纯化回收凝胶上16S rDNA片段的PCR扩增产物 | 第32-33页 |
| ·制备大肠杆菌DH5α的感受态细胞 | 第33页 |
| ·DNA片段的连接 | 第33页 |
| ·酶连产物转化大肠杆菌DH5α | 第33页 |
| ·酶连产物转化子的质粒抽提 | 第33-34页 |
| ·酶连产物验证和测序 | 第34页 |
| ·四个菌株同源性分析 | 第34页 |
| ·B.CEREUS SHENZHEN 754-1菌株发酵产酶条件的优化 | 第34-36页 |
| ·发酵液的制备 | 第34页 |
| ·卵黄琼脂平板法测定PLC的酶活 | 第34页 |
| ·NPPC法测定PLC的酶活 | 第34-35页 |
| ·培养时间对B.cereus Shenzhen 754-1产酶水平的影响 | 第35页 |
| ·培养温度对B.cereus Shenzhen 754-1产酶水平的影响 | 第35页 |
| ·接种量对B.cereus Shenzhen 754-1产酶水平的影响 | 第35页 |
| ·摇床转速对B.cereus Shenzhen 754-1产酶水平的影响 | 第35页 |
| ·正交试验 | 第35页 |
| ·B.cereus Shenzhen 754-1生长曲线及产酶曲线的测定 | 第35-36页 |
| ·金属离子对产酶水平的影响 | 第36页 |
| ·卵黄对产酶水平的影响 | 第36页 |
| ·营养成分优化实验 | 第36页 |
| ·磷脂酶C理化特性的研究 | 第36-38页 |
| ·PLC分子量测定 | 第36页 |
| ·PLC热稳定性测定 | 第36页 |
| ·PLC溶血活性检测 | 第36-37页 |
| ·PLC酶反应最适温度的测定 | 第37页 |
| ·PLC酶反应最适pH的测定 | 第37-38页 |
| 结果与分析 | 第38-60页 |
| ·菌株的初筛 | 第38页 |
| ·菌株的复筛 | 第38页 |
| ·抗血小板聚集率测定 | 第38-41页 |
| ·抗兔血小板聚集率测定 | 第38-40页 |
| ·抗人血小板聚集率测定 | 第40-41页 |
| ·菌种分类与鉴定 | 第41-50页 |
| ·形态学特征 | 第41-44页 |
| ·个体形态 | 第41-43页 |
| ·群体形态特征 | 第43-44页 |
| ·生理生化特征 | 第44-46页 |
| ·16S rDNA序列的PCR扩增和测定 | 第46-49页 |
| ·同源性分析 | 第49-50页 |
| ·系统进化树 | 第49页 |
| ·同源性比较 | 第49-50页 |
| ·B.CEREUS SHENZHEN 754-1菌株发酵产酶条件的优化 | 第50-57页 |
| ·培养时间对B.cereus Shenzhen 754-1产酶的影响 | 第50-51页 |
| ·培养温度对B.cereus Shenzhen 754-1产酶的影响 | 第51页 |
| ·接种量对B.cereus Shenzhen 754-1产酶的影响 | 第51-52页 |
| ·摇床转速对B.cereus Shenzhen 754-1产酶的影响 | 第52页 |
| ·正交试验 | 第52-53页 |
| ·B.cereus Shenzhen 754-1生长曲线的测定 | 第53-54页 |
| ·金属离子对产酶的影响 | 第54页 |
| ·卵黄对产酶的影响 | 第54-55页 |
| ·正交实验 | 第55-56页 |
| ·NaCl、Zn~(2+)、卵黄的浓度优化实验 | 第56-57页 |
| ·磷脂酶C理化特性的研究 | 第57-60页 |
| ·PLC分子量测定 | 第57页 |
| ·PLC的热稳定性 | 第57页 |
| ·PLC的溶血性 | 第57-58页 |
| ·PLC酶反应的最适温度 | 第58-59页 |
| ·PLC酶反应的最适pH值 | 第59-60页 |
| 讨论 | 第60-64页 |
| ·磷脂酶C高产菌株的分离与筛选 | 第60页 |
| ·筛选对象 | 第60页 |
| ·筛选方法 | 第60页 |
| ·磷脂酶C高产菌株的分类与鉴定 | 第60-61页 |
| ·磷脂酶C高产菌株培养条件的优化 | 第61-62页 |
| ·培养时间对产酶的影响 | 第61页 |
| ·培养温度对产酶的影响 | 第61页 |
| ·转速对产酶的影响 | 第61-62页 |
| ·生长曲线 | 第62页 |
| ·卵黄液对产酶的影响 | 第62页 |
| ·金属离子对产酶的影响 | 第62页 |
| ·接种量对产酶的影响 | 第62页 |
| ·磷脂酶C理化特性的研究 | 第62-64页 |
| 结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 作者简介 | 第72页 |
| [附]在读期间发表论文: | 第72页 |
