| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-22页 |
| ·SIV的基本概况 | 第14-19页 |
| ·SIV的生物学活性 | 第15页 |
| ·SIV的基因组结构及编码蛋白 | 第15-16页 |
| ·SIV的复制 | 第16-17页 |
| ·SIV的抗原性变异 | 第17页 |
| ·SIV种间传播的分子机理 | 第17-18页 |
| ·SI的公共卫生 | 第18页 |
| ·SI的流行现状 | 第18-19页 |
| ·SIV血清学诊断方法 | 第19-21页 |
| ·SI血凝和血凝抑制试验 | 第19-20页 |
| ·SI神经氨酸酶抑制试验 | 第20页 |
| ·SI中和试验 | 第20页 |
| ·琼脂凝胶扩散试验 | 第20页 |
| ·免疫荧光法 | 第20-21页 |
| ·酶联免疫吸附试验 | 第21页 |
| ·本试验研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| 第二章 H3N2亚型SIV遗传演化分析 | 第22-37页 |
| ·材料 | 第22-23页 |
| ·试验用病毒株 | 第22页 |
| ·鸡胚 | 第22页 |
| ·主要试剂 | 第22-23页 |
| ·主要仪器 | 第23页 |
| ·菌种 | 第23页 |
| ·引物设计 | 第23页 |
| ·方法 | 第23-28页 |
| ·病毒分离及有限稀释克隆纯化 | 第23-24页 |
| ·红细胞凝集(HA)试验 | 第24页 |
| ·红细胞凝集抑制(HI)试验 | 第24页 |
| ·病毒核酸的提取 | 第24页 |
| ·基因的RT-PCR扩增 | 第24-25页 |
| ·PCR产物的琼脂糖凝胶电泳 | 第25页 |
| ·PCR产物回收和纯化 | 第25-26页 |
| ·大肠杆菌感受态DH5α的制备 | 第26页 |
| ·目的基因DNA产物的连接与转化 | 第26页 |
| ·阳性重组质粒的筛选 | 第26页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第26-27页 |
| ·质粒DNA纯化 | 第27页 |
| ·质粒DNA测序 | 第27-28页 |
| ·序列拼接与分析 | 第28页 |
| ·结果与分析 | 第28-36页 |
| ·五株H3N2亚型病毒表面基因RT-PCR产物 | 第28-29页 |
| ·毒株SW/GD/9/05内部基因RT-PCR产物 | 第29页 |
| ·五株病毒HA基因的阳性克隆 | 第29-30页 |
| ·五株病毒HA基因编码区核苷酸序列同源性比较 | 第30页 |
| ·与五株病毒八个基因片段同源性最高的毒株 | 第30页 |
| ·SW/GD/9/05与参考病毒株HA基因编码区核苷酸序列绘制的系统进化树 | 第30-31页 |
| ·SW/GD/9/05的PB2基因与参考病毒株PB2基因编码区核苷酸序列绘制的系统进化树 | 第31-32页 |
| ·SW/GD/9/05的NP基因与参考病毒株NP基因编码区核苷酸序列绘制的系统进化树 | 第32-33页 |
| ·五株病毒HA1蛋白氨基酸序列的比较 | 第33-36页 |
| ·讨论 | 第36-37页 |
| 第三章 H3N2亚型SIV HA1基因的原核表达与纯化 | 第37-49页 |
| ·材料 | 第37页 |
| ·病毒株 | 第37页 |
| ·SPF鸡 | 第37页 |
| ·主要试剂 | 第37页 |
| ·主要仪器 | 第37页 |
| ·质粒和菌种 | 第37页 |
| ·引物设计 | 第37页 |
| ·方法 | 第37-43页 |
| ·抗体效价(HI)测定 | 第38页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第38-40页 |
| ·重组表达质粒的鉴定 | 第40-41页 |
| ·HA1蛋白在大肠杆菌中表达 | 第41页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第41-42页 |
| ·Western-blot免疫印迹检测 | 第42页 |
| ·HA1融合蛋白的纯化 | 第42-43页 |
| ·结果 | 第43-47页 |
| ·HI结果分析 | 第43页 |
| ·HA1基因的RT-PCR | 第43-44页 |
| ·重组质粒pET-HA1的鉴定 | 第44-46页 |
| ·重组蛋白SDS-PAGE电泳 | 第46页 |
| ·重组蛋白的Western blot检测 | 第46-47页 |
| ·pET-HAI融合表达蛋白的纯化 | 第47页 |
| ·讨论 | 第47-49页 |
| 第四章 H3N2亚型SIV重组HA1蛋白间接ELISA检测方法的建立 | 第49-63页 |
| ·材料 | 第49-50页 |
| ·抗原 | 第49页 |
| ·血清和酶标抗体 | 第49页 |
| ·ELISA相关溶液 | 第49-50页 |
| ·主要仪器和设备 | 第50页 |
| ·间接ELISA方法的建立 | 第50-52页 |
| ·间接ELISA操作程序 | 第50页 |
| ·不同抗原包被浓度和血清稀释度试验 | 第50页 |
| ·不同封闭液的对比试验 | 第50-51页 |
| ·不同封闭时间的对比试验 | 第51页 |
| ·一抗最佳作用时间的试验 | 第51页 |
| ·酶标二抗稀释倍数和作用时间试验 | 第51页 |
| ·间接ELISA方法阴阳性临界值的确定 | 第51页 |
| ·重复性试验 | 第51-52页 |
| ·与HI检测方法比较 | 第52页 |
| ·交叉试验 | 第52页 |
| ·结果 | 第52-61页 |
| ·抗原最适包被浓度及血清最佳稀释度的确定 | 第52-54页 |
| ·封闭液的选择 | 第54-55页 |
| ·最适封闭时间的确定 | 第55-56页 |
| ·一抗最佳作用时间 | 第56-57页 |
| ·酶标抗体最适稀释浓度的确定 | 第57-58页 |
| ·酶标抗体最适作用时间的确定 | 第58-59页 |
| ·阴阳性判定标准的确定 | 第59-60页 |
| ·重复性试验 | 第60-61页 |
| ·交叉试验 | 第61页 |
| ·与HI比较试验 | 第61页 |
| ·讨论 | 第61-63页 |
| 第五章 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-68页 |
| 附录 | 第68-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 作者简介 | 第78页 |
