| 目录 | 第1-6页 |
| 中文摘要 | 第6-7页 |
| 英文摘要 | 第7-9页 |
| 1 前言 | 第9-18页 |
| ·上游开放读码框(uORF)的结构和功能简介 | 第9-11页 |
| ·上游开放读码框(uORF)的结构 | 第9-10页 |
| ·上游开放读码框(uORF)的调控作用和机制 | 第10-11页 |
| ·骨形成蛋白受体-Ⅱ(BMPR-Ⅱ)基因结构和功能的简介 | 第11-16页 |
| ·BMPR-Ⅱ基因结构 | 第11-12页 |
| ·BMPs信号通路及BMPR-Ⅱ的作用机制 | 第12-13页 |
| ·BMPR-Ⅱ基因与原发性肺动脉高血压(PPH)的关系 | 第13-15页 |
| ·BMPR-Ⅱ基因与其他疾病的关系 | 第15页 |
| ·BMPR-Ⅱ基因在发育过程中的作用 | 第15-16页 |
| ·人BMPR-Ⅱ基因5′前导序列的uORF | 第16页 |
| ·国内外研究现状和课题意义 | 第16-18页 |
| 2 技术路线 | 第18-19页 |
| 3 实验仪器与材料 | 第19-23页 |
| ·材料 | 第19-21页 |
| ·菌种、载体和细胞系 | 第19页 |
| ·主要试剂 | 第19-20页 |
| ·其它主要试剂的配方 | 第20-21页 |
| ·主要仪器 | 第21-23页 |
| 4 实验方法 | 第23-34页 |
| ·BMPR-Ⅱ基因uORFs起始密码子突变体重组荧光素酶报告质粒的构建 | 第23-31页 |
| ·重叠延伸PCR | 第26-29页 |
| ·PCR产物酶切 | 第29页 |
| ·酶切产物的清洁回收 | 第29页 |
| ·连接 | 第29-30页 |
| ·制备感受态细胞 | 第30页 |
| ·转化 | 第30页 |
| ·接种 | 第30-31页 |
| ·转化子快速鉴定 | 第31页 |
| ·抽提质粒 | 第31页 |
| ·重组质粒鉴定 | 第31页 |
| ·Hela细胞培养 | 第31-32页 |
| ·重组质粒转染及瞬时表达 | 第32页 |
| ·双荧光素酶试验 | 第32-34页 |
| ·Hela细胞裂解物的制备 | 第32页 |
| ·双荧光素酶活性测定 | 第32-34页 |
| 5 实验结果 | 第34-45页 |
| ·重叠延伸PCR对uORFs中起始密码子的突变 | 第34-36页 |
| ·重组突变体荧光素酶报告质粒的双酶切、PCR及测序鉴定 | 第36-41页 |
| ·重组报告质粒转染Hela细胞及双荧光素酶活性测定 | 第41-42页 |
| ·人BMPR-Ⅱ基因5′前导序列开放读码框uORFs的序列分析 | 第42-45页 |
| 6 讨论 | 第45-48页 |
| ·荧光素酶报告基因分析法 | 第45页 |
| ·BMPR-Ⅱ基因5′前导序列中的uORFs的表达调控功能 | 第45-46页 |
| ·BMPR-Ⅱ基因5′前导序列中的uORFs的表达调控机制 | 第46-48页 |
| 7 结论 | 第48-49页 |
| 8 参考文献 | 第49-54页 |
| 附录 | 第54-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
