| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-27页 |
| ·未培养微生物研究概况及其发展前景 | 第12-15页 |
| ·未培养微生物发展概况 | 第12-14页 |
| ·未培养微生物的发展前景 | 第14-15页 |
| ·β-葡萄糖苷酶简介及研究概况 | 第15-26页 |
| ·β-葡萄糖苷酶简介 | 第15-18页 |
| ·β-葡萄糖苷酶研究概况 | 第18-26页 |
| ·β-葡萄糖苷酶作用机理的研究 | 第19-20页 |
| ·β-葡萄糖苷酶基因的克隆与表达 | 第20-22页 |
| ·关于β—葡萄糖苷酶的酶学性质研究 | 第22-24页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的固定化研究 | 第24-25页 |
| ·β-葡萄糖苷酶研究的理论和应用意义 | 第25-26页 |
| ·展望 | 第26-27页 |
| 第二章 材料与方法 | 第27-47页 |
| ·菌株和质粒 | 第27页 |
| ·培养基、生长条件及常用抗生素 | 第27-29页 |
| ·培养基 | 第27-28页 |
| ·培养条件 | 第28页 |
| ·菌种保存 | 第28-29页 |
| ·抗菌素 | 第29页 |
| ·溶液、缓冲液和试剂 | 第29-30页 |
| ·所用仪器 | 第30-31页 |
| ·质粒DNA的制备 | 第31-34页 |
| ·碱变性法小量提取质粒DNA | 第31-32页 |
| ·大量制备质粒DNA | 第32-33页 |
| ·试剂盒提取质粒 | 第33-34页 |
| ·试剂盒小量提取质粒 | 第33页 |
| ·试剂盒大量提取质粒 | 第33-34页 |
| ·质粒DNA的纯化、定量与沉淀 | 第34-35页 |
| ·质粒DNA的沉淀与贮存 | 第34页 |
| ·分光光度法测定DNA浓度 | 第34-35页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第35页 |
| ·DNA酶切 | 第35-37页 |
| ·DNA的限制性内切酶酶切 | 第35-36页 |
| ·DNA酶切片段的分离与回收 | 第36-37页 |
| ·从低熔点胶中回收DNA片段 | 第36页 |
| ·试剂盒法回收DNA片段 | 第36-37页 |
| ·DNA的连接 | 第37-38页 |
| ·载体质粒DNA的去磷酸化处理 | 第37页 |
| ·DNA的连接 | 第37-38页 |
| ·质粒DNA的转化 | 第38-39页 |
| ·E.coli感受态细胞的快速制备及质粒DNA的电脉冲导入 | 第38-39页 |
| ·PCR扩增DNA片段 | 第39页 |
| ·基因的表达与检测 | 第39-47页 |
| ·所用溶液 | 第39-41页 |
| ·蛋白质样品的制备 | 第41-42页 |
| ·SDS-PAGE蛋白质电泳 | 第42页 |
| ·亲和层析纯化目标蛋白 | 第42-43页 |
| ·蛋白质浓度标准曲线的绘制 | 第43-44页 |
| ·pNPG法测定β-葡萄糖苷酶的酶活 | 第44-47页 |
| 第三章 β-葡萄糖苷酶编码基因的克隆及序列分析 | 第47-65页 |
| ·碱性土壤宏基因组DNA文库AL01中β-葡萄糖苷酶编码基因的克隆及验证 | 第47-48页 |
| ·碱性土壤宏基因组DNA文库AL01中β-葡萄糖苷酶基因的活性筛选 | 第47页 |
| ·β-葡萄糖苷酶基因的验证 | 第47-48页 |
| ·β-葡萄糖苷酶基因序列分析结果 | 第48-63页 |
| ·pGXAG142的序列测定及其序列分析结果 | 第48-52页 |
| ·pGXAG142的序列测定 | 第48-50页 |
| ·pGXAG142的序列分析 | 第50-52页 |
| ·pGXAG313的序列测定及其序列分析结果 | 第52-56页 |
| ·pGXAG313的序列测定 | 第52-53页 |
| ·pGXAG313序列分析 | 第53-56页 |
| ·pGXAG805的序列测定及其序列分析结果 | 第56-61页 |
| ·pGXAG805的序列测定 | 第56-59页 |
| ·pGXAG805序列分析 | 第59-61页 |
| ·系统进化树的构建 | 第61-63页 |
| ·结果 | 第63页 |
| ·讨论 | 第63-65页 |
| 第四章 β-葡萄糖苷酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第65-83页 |
| ·PCR扩增β-葡萄糖苷酶基因 | 第65-67页 |
| ·β-葡萄糖苷酶基因重组质粒的构建及表达 | 第67-74页 |
| ·pGXAG142G重组质粒的构建及表达 | 第67-70页 |
| ·pGXAG142G重组质粒的构建 | 第67-68页 |
| ·pGXAG142G/Rosetta(DE3)plysS在大肠杆菌中的诱导表达 | 第68-69页 |
| ·Pgxag142g目标蛋白的纯化 | 第69-70页 |
| ·pGXAG313G的表达载体的构建及表达 | 第70-72页 |
| ·pGXAG313G的表达载体的构建 | 第70-71页 |
| ·pGXAG313G/Rosetta(DE3)plysS在大肠杆菌中的诱导表达 | 第71页 |
| ·Pgxag313g目标蛋白的纯化 | 第71-72页 |
| ·pGXAG805G的重组质粒的构建及表达 | 第72-74页 |
| ·pGXAG805G重组质粒的构建及验证 | 第72-74页 |
| ·pGXAG805G/Rosetta(DE3)plysS在大肠杆菌中的诱导表达 | 第74页 |
| ·Pgxag142g的酶学特性分析 | 第74-80页 |
| ·HPLC产物分析 | 第80-81页 |
| ·结论 | 第81页 |
| ·讨论 | 第81-83页 |
| 第五章 展望 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-93页 |
| 致谢 | 第93-94页 |
| 攻读硕士学位期间所发表的论文与研究成果 | 第94页 |
