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乙肝表面抗原大蛋白(S1S2S)基因三种不同表达载体转化苹果和番茄的研究

摘要第1-9页
ABSTRACT第9-11页
缩略语第11-12页
前言第12-15页
第一章 文献综述第15-30页
 1 转基因植物及口服疫苗第15-20页
   ·转基因植物第15-16页
   ·口服疫苗第16-20页
     ·利用植物生产口服疫苗的途径第17页
     ·植物口服疫苗的作用机理第17页
     ·转基因植物生产口服疫苗的优点第17-18页
     ·已研制的口服疫苗第18-19页
     ·转基因植物口服疫苗的动物实验和临床实验第19-20页
 2 HBsAG基因第20-26页
   ·乙型肝炎病毒(HBV)第20-22页
   ·HBsAg基因的结构第22-23页
   ·转基因植物生产HBsAg疫苗的研究进展第23-24页
     ·国内植物转HBsAg基因的研究第23页
     ·国外在植物表达HBsAg基因的研究第23-24页
   ·转基因植物中HBsAg表达量第24页
   ·稳定高效的表达载体第24-26页
   ·问题及展望第26页
 3 苹果转基因研究进展第26-30页
   ·导入的外源基因种类及其表达和遗传第26-27页
   ·影响转化的因素第27-28页
     ·菌株第27-28页
     ·侵染时间第28页
     ·共培养第28页
     ·酚类物质第28页
     ·转化植株选择策略第28页
   ·存在的问题及展望第28-30页
     ·存在的问题第28-29页
     ·展望第29-30页
第二章 农杆菌介导的乙肝表面抗原大蛋白(S1S2S)基因不同表达载体转化苹果‘凉香季节’的研究第30-41页
 1 材料和方法第31-35页
   ·材料第31-32页
     ·植物材料第31页
     ·工程菌株和载体质粒第31-32页
       ·目的基因和载体质粒第31页
       ·工程菌株及其培养基(液)第31-32页
     ·培养基第32页
     ·GUS染色液配方第32页
     ·实验仪器第32页
   ·方法第32-35页
     ·苹果转化的基本程序第32-33页
     ·遗传转化体系的优化第33页
       ·再生体系的优化第33页
       ·叶片与组培苗Km选择压的确定第33页
       ·抑菌抗生素种类和浓度的确定第33页
     ·GUS染色鉴定第33页
     ·PCR法检测第33-35页
       ·植物基因组DNA的抽提第33-34页
       ·质粒DNA的提取第34-35页
       ·PCR扩增目的基因第35页
 2 结果与分析第35-39页
   ·不同外植体类型对再生频率的影响第35-36页
   ·叶片与组培苗Km选择压的确定第36-37页
   ·抑菌抗生素对转化叶片再生的影响第37-38页
   ·转基因‘凉香季节’植株的GUS组织化学染色检测第38页
   ·转基因‘凉香季节’植株的PCR检测第38-39页
 3 讨论第39-41页
   ·抗生素的选择第39-40页
   ·转基因植株的检测第40-41页
第三章 采用SAAT技术将S1S2S基因转入‘红爱佳’苹果的研究第41-49页
 1 材料和方法第42-44页
   ·材料第42-43页
     ·植物材料第42页
     ·工程菌株和载体质粒第42页
       ·目的基因和载体质粒第42页
       ·工程菌株及其培养基(液)第42页
     ·所用培养基第42页
     ·GUS染色液配方第42-43页
     ·实验仪器第43页
   ·方法第43-44页
     ·农杆菌的培养、活化第43页
     ·不同超声波处理时期对农杆菌介导的影响第43页
     ·不同超声波处理时间对农杆菌介导的影响第43页
     ·不同超声波处理功率对农杆菌介导的影响第43页
     ·不同外植体类型对超声波辅助介导的影响第43-44页
     ·乙酰丁香酮(As)浓度对gus基因瞬时表达率的影响第44页
     ·抗性植株的获得第44页
     ·GUS基因瞬时表达检测第44页
 2 结果与分析第44-47页
   ·最适处理时期第44-45页
   ·最佳处理时间第45页
   ·超声波处理的最适功率第45-46页
   ·最适外植体类型第46-47页
   ·乙酰丁香酮(As)浓度对gus基因瞬时表达率的影响第47页
   ·抗性植株的获得第47页
 3 讨论第47-49页
第四章 农杆菌介导的乙肝表面抗原大蛋白(S1S2S)基因三种不同表达载体转化番茄的研究第49-58页
 1 材料与方法第50-52页
   ·材料第50-51页
     ·植物材料第50页
     ·工程菌株和载体质粒第50页
     ·培养基第50页
     ·GUS染色液配方第50页
     ·实验仪器第50-51页
   ·方法第51-52页
     ·番茄种子初代培养的建立第51页
     ·番茄子叶再生体系的建立第51页
       ·不同基因型对番茄子叶愈伤组织形成和不定芽分化的影响第51页
       ·不同植物生长调节剂及其浓度组合对‘江蔬1号’番茄子叶再生的影响第51页
     ·番茄的转化第51-52页
       ·番茄转化的基本程序第51页
       ·GUS染色鉴定第51页
       ·PCR法检测外源基因的整合第51-52页
     ·生根培养基的筛选与驯化移栽第52页
     ·统计分析第52页
 2 结果与分析第52-56页
   ·番茄种子初代培养的建立第52-53页
   ·番茄子叶再生体系的建立第53-54页
     ·不同基因型对番茄子叶愈伤组织形成和不定芽分化的影响第53页
     ·不同生长素种类及其浓度对‘江蔬1号’子叶愈伤组织形成和不定芽分化的影响第53-54页
     ·不同细胞分裂素种类及其浓度对‘江蔬1号’子叶愈伤组织形成和不定芽分化的影响第54页
   ·番茄的遗传转化第54-56页
     ·番茄抗性植株GUS染色检测第54-55页
     ·转基因番茄植株的PCR检测第55-56页
   ·生根培养基的筛选与驯化移栽第56页
 3 讨论第56-58页
全文结论第58-59页
参考文献第59-66页
附录一 基因序列及质粒图谱第66-72页
附录二 图版第72-73页
致谢第73页

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