| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 上篇 文献综述 | 第9-24页 |
| 前言 | 第9页 |
| 第一章 转基因林木的生态安全性 | 第9-11页 |
| 1. 转基因林木应用的安全现状 | 第9-10页 |
| 2. 转基因林木对环境的可能影响 | 第10页 |
| 3. 防范转基因林木对环境可能影响的对策 | 第10-11页 |
| 第二章 选择标记基因引起的转基因安全性问题及对策 | 第11-18页 |
| 1. 选择标记基因的应用及原理 | 第11页 |
| 2. 常用的选择标记基因 | 第11-12页 |
| 3. 选择标记基因的安全性问题 | 第12-14页 |
| ·选择标记可能影响基因的表达 | 第12-13页 |
| ·选择标记可能影响环境安全 | 第13页 |
| ·选择标记可能危及人身安全 | 第13-14页 |
| ·选择标记可限制多个基因的转化 | 第14页 |
| ·选择标记可能影响植物的某些性状 | 第14页 |
| 4. 解决选择标记基因安全性问题的策略 | 第14-18页 |
| ·避免使用选择标记基因 | 第14-15页 |
| ·使用无争议的生物安全标记基因 | 第15-16页 |
| ·与糖代谢途径相关的基因 | 第15页 |
| ·甜菜醛脱氢酶基因 | 第15-16页 |
| ·与激素代谢途径相关的基因 | 第16页 |
| ·谷氨酸-1-半醛转氨酶基因 | 第16页 |
| ·利用报告基因 | 第16-17页 |
| ·GUS 基因 | 第17页 |
| ·绿色荧光蛋白（GFP）基因 | 第17页 |
| ·选择标记基因的去除 | 第17-18页 |
| 第三章 去除选择标记基因的策略 | 第18-24页 |
| 1. 共转化法 | 第18页 |
| 2. 位点特异性重组 | 第18-21页 |
| ·Cre/lox 系统 | 第19-20页 |
| ·FLP/FRT 系统 | 第20页 |
| ·R/RS 系统 | 第20页 |
| ·化学诱导表达的位点特异性重组系统 | 第20-21页 |
| 3. 转座子系统 | 第21页 |
| 4. 利用同源重组作用 | 第21页 |
| 5. 利用其他方法 | 第21-23页 |
| 6. 本研究的目的和意义 | 第23-24页 |
| 下篇 研究报告 | 第24-53页 |
| 第一章 可去除选择标记植物表达载体的构建 | 第24-34页 |
| 1. 材料 | 第24-25页 |
| ·质粒 | 第24页 |
| ·菌株 | 第24-25页 |
| ·酶和试剂 | 第25页 |
| ·仪器和设备 | 第25页 |
| ·培养基 | 第25页 |
| 2. 方法 | 第25-28页 |
| ·质粒DNA 的提取 | 第25-26页 |
| ·碱法小量提取质粒DNA | 第25-26页 |
| ·试剂盒提取质粒DNA | 第26页 |
| ·DNA片段回收 | 第26-27页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第27页 |
| ·大肠杆菌转化及蓝白斑筛选 | 第27页 |
| ·农杆菌感受态的制备 | 第27页 |
| ·液氮冻融法转化农杆菌 | 第27-28页 |
| ·保存菌株 | 第28页 |
| 3. 可去除选择标记表达载体构建路线 | 第28-32页 |
| ·含CpTI 基因的DNA 片段的扩增 | 第29-30页 |
| ·引物设计 | 第29页 |
| ·PCR 扩增 | 第29页 |
| ·回收片段与T 载体连接 | 第29页 |
| ·转化子的鉴定与测序 | 第29-30页 |
| ·CpTI 基因的获得 | 第30-31页 |
| ·引物设计 | 第30页 |
| ·PCR 扩增 | 第30页 |
| ·CpTI 基因与T 载体连接 | 第30-31页 |
| ·转化子鉴定 | 第31页 |
| ·酶切与连接 | 第31页 |
| ·酶切 | 第31页 |
| ·连接 | 第31页 |
| ·PCR 检测 | 第31页 |
| ·农杆菌转化与保菌 | 第31-32页 |
| 4. 结果与分析 | 第32-34页 |
| ·测序结果分析 | 第32页 |
| ·PCR 扩增CpTI 基因 | 第32-33页 |
| ·PX6-GFP 和PMD19-CpTI 酶切结果 | 第33页 |
| ·讨论 | 第33-34页 |
| 第二章 南林895 杨遗传转化 | 第34-43页 |
| 1. 材料 | 第34-35页 |
| ·植物材料 | 第34页 |
| ·菌株和质粒 | 第34页 |
| ·抗生素与激素 | 第34页 |
| ·植物培养基 | 第34-35页 |
| 2. 方法 | 第35-38页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化（叶盘法） | 第35-36页 |
| ·预培养 | 第35页 |
| ·正负对照的设置 | 第35页 |
| ·外植体的侵染 | 第35页 |
| ·共培养 | 第35-36页 |
| ·筛选培养 | 第36页 |
| ·芽伸长培养 | 第36页 |
| ·生根培养 | 第36页 |
| ·继代培养 | 第36页 |
| ·Km 抗性植株的分子检测 | 第36-38页 |
| ·CTAB 法提取植物总DNA | 第36-37页 |
| ·Km 抗性植株的PCR 检测 | 第37-38页 |
| ·转基因植株的移栽 | 第38页 |
| 3. 结果与分析 | 第38-41页 |
| ·Km抗性植株的获得 | 第38-40页 |
| ·Km抗性植株的分子检测结果 | 第40-41页 |
| 4. 讨论 | 第41-43页 |
| ·转化过程中一些问题的探讨 | 第41-42页 |
| ·假转化体的产生 | 第42页 |
| ·转化过程中T-DNA 片段整合的不完整性 | 第42-43页 |
| 第三章 选择标记基因的去除 | 第43-52页 |
| 1. 材料 | 第43页 |
| ·植物材料 | 第43页 |
| ·试剂 | 第43页 |
| ·培养基 | 第43页 |
| 2. 方法 | 第43-46页 |
| ·载体PX6-GFP 去除选择标记的原理 | 第43-44页 |
| ·转基因植株标记基因去除的诱导 | 第44页 |
| ·转基因植株标记基因去除的检测 | 第44-46页 |
| ·PCR 检测 | 第44-45页 |
| ·测序检测 | 第45页 |
| ·GFP 检测 | 第45-46页 |
| ·去除标记基因后叶盘的Km 敏感性测定 | 第46页 |
| 3. 结果与分析 | 第46-50页 |
| ·PCR 检测结果 | 第46-47页 |
| ·测序检测结果 | 第47-48页 |
| ·GFP 检测结果 | 第48-49页 |
| ·去除标记基因后叶盘的Km 敏感性测定结果 | 第49-50页 |
| 4. 讨论 | 第50-52页 |
| ·可去除选择标记载体系统PX6 的优点 | 第50页 |
| ·PX6 载体系统去除标记基因效率 | 第50-51页 |
| ·利用标记基因的去除进行多次转化 | 第51-52页 |
| 第四章 主要结论和进一步的研究展望 | 第52-53页 |
| 1. 主要结论 | 第52页 |
| 2. 进一步研究展望 | 第52-53页 |
| 附录 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 详细摘要 | 第60-63页 |