| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 1 前言 | 第10-12页 |
| 2 材料与方法 | 第12-21页 |
| ·实验材料 | 第12-14页 |
| ·细胞系及细胞培养所需主要试剂 | 第12页 |
| ·实验中主要化学药品与试剂 | 第12-13页 |
| ·实验中主要仪器 | 第13-14页 |
| ·实验方法 | 第14-21页 |
| ·药物的配制 | 第14页 |
| ·Saos-2 细胞的培养 | 第14页 |
| ·细胞培养冻存 | 第14-15页 |
| ·细胞培养复苏 | 第15页 |
| ·耐药细胞系的诱导 | 第15页 |
| ·生物学特性观察 | 第15-16页 |
| ·光镜下细胞形态观察 | 第15页 |
| ·电子显微镜观察细胞超微结构 | 第15页 |
| ·细胞生长曲线测定 | 第15-16页 |
| ·流式细胞仪测定细胞周期分布 | 第16页 |
| ·药敏试验 | 第16-17页 |
| ·MTT 法药敏实验原理 | 第16页 |
| ·实 验方法 | 第16-17页 |
| ·半定量 RT-PCR 方法测定 Saos-2、Saos-2/MTX2.2、 Saos-2/MTX4.4 细胞株 RFC 基因的m RNA 表达 | 第17-19页 |
| ·RNA 的提取 | 第17页 |
| ·逆转录反应cDNA 的合成 | 第17-18页 |
| ·PCR 反应扩增目的基因片段 | 第18-19页 |
| ·用液闪液仪分别测定 Saos-2、Saos-2/MTX4.4 细胞系细胞内 ~3H-MTX 含量 | 第19-20页 |
| ·统计学处理 | 第20-21页 |
| 3 实验结果 | 第21-33页 |
| ·Saos-2/MTX2.2、Saos-2/MTX4.4 耐药细胞株的建立 | 第21页 |
| ·Saos-2/MTX2.2、 Saos-2/MTX4.4 细胞系生物学特性 | 第21-28页 |
| ·细胞形态变 化 | 第21-24页 |
| ·细胞生长曲线与倍增时间 | 第24-25页 |
| ·布流式细胞仪检测细胞周期分布结果 | 第25-27页 |
| ·Saos-2、Saos-2/MTX2.2 、 Saos-2/MTX4.4 细胞株对 MTX 药物敏感性与多药耐药特性测定结果 | 第27-28页 |
| ·Saos-2/MTX4.4 细胞株对 MTX 耐药性的稳定性测定结果 | 第28页 |
| ·Saos-2 、Saos-2/MTX2.2 and Saos-2 /MTX4.4 细胞系 RFC 基因的 mRNA 检测结果 | 第28-31页 |
| ·Saos-2、Saos-2/MTX4.4 细胞系细胞内 3H-MTX 含量 | 第31-33页 |
| 4 讨论 | 第33-40页 |
| ·新辅助化疗在骨肉瘤治疗中的应用和发展 | 第33-34页 |
| ·大剂量 MTX 在骨肉瘤化疗方案中的应用 | 第34-35页 |
| ·RFC 与 MTX 的耐药机制 | 第35-36页 |
| ·本实验的结果分析 | 第36-40页 |
| 5 结论 | 第40-41页 |
| 6 参考文献 | 第41-44页 |
| 7 致谢 | 第44-45页 |
| 8 附录 | 第45-57页 |
| 9 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第57-59页 |
