| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 缩略语表 | 第9-10页 |
| 1.前言 | 第10-21页 |
| ·课题的提出 | 第10页 |
| ·标记基因安全性问题研究现状 | 第10-14页 |
| ·常用标记基因 | 第10-11页 |
| ·解决标记基因安全性问题的方法 | 第11-14页 |
| ·无抗性标记基因的遗传转化 | 第11-12页 |
| ·发展安全标记基因用于遗传转化 | 第12-14页 |
| ·PMI／甘露糖选择系统 | 第14-17页 |
| ·PMI研究概述 | 第14页 |
| ·PMI／甘露糖选择系统的原理 | 第14页 |
| ·PMI／甘露糖选择系统的应用 | 第14-15页 |
| ·影响PMI／甘露糖系统选择效率的因素 | 第15-16页 |
| ·转基因植株中PMI检测方法 | 第16-17页 |
| ·PMI／甘露糖选择系统安全性评估 | 第17页 |
| ·启动子在植物遗传转化中的应用 | 第17-19页 |
| ·Floral dip转化法 | 第19-21页 |
| 2.研究目的及意义 | 第21-22页 |
| 3.材料与方法 | 第22-30页 |
| ·实验材料 | 第22-25页 |
| ·植物材料 | 第22页 |
| ·菌株及质粒 | 第22页 |
| ·酶和试剂 | 第22页 |
| ·培养基及主要试剂 | 第22-24页 |
| ·培养基 | 第22页 |
| ·质粒DNA提取相关试剂 | 第22-23页 |
| ·大肠杆菌总DNA提取相关试剂 | 第23页 |
| ·拟南芥叶片DNA提取液 | 第23页 |
| ·SDS-PAGE相关试剂 | 第23页 |
| ·GST蛋白诱导及纯化相关试剂 | 第23页 |
| ·拟南芥转化重悬液 | 第23-24页 |
| ·苯酚红显色法相关试剂 | 第24页 |
| ·氯酚红显色法相关试剂 | 第24页 |
| ·引物 | 第24-25页 |
| ·实验方法 | 第25-30页 |
| ·质粒DNA提取 | 第25页 |
| ·大肠杆菌总DNA提取 | 第25页 |
| ·拟南芥叶片DNA提取 | 第25-26页 |
| ·DNA片段回收 | 第26页 |
| ·感受态细胞制备及转化 | 第26-27页 |
| ·PCR扩增 | 第27页 |
| ·常规PCR扩增 | 第27页 |
| ·菌体PCR | 第27页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第27-28页 |
| ·GST蛋白诱导表达及纯化 | 第28页 |
| ·拟南芥转化及筛选 | 第28-29页 |
| ·转化方法 | 第28-29页 |
| ·筛选浓度 | 第29页 |
| ·转基因植株筛选 | 第29页 |
| ·PMI活性检测 | 第29-30页 |
| 4.结果与分析 | 第30-42页 |
| ·manA基因的克隆及测序 | 第30页 |
| ·manA在大肠杆菌的诱导表达 | 第30-32页 |
| ·原核表达载体pGEX-PMI的构建 | 第30页 |
| ·manA在大肠杆菌的诱导表达 | 第30-31页 |
| ·GST-PMI融合蛋白的纯化及酶切 | 第31-32页 |
| ·苯酚红显色法检测融合蛋白活性 | 第32页 |
| ·以manA为标记基因系列表达载体的构建 | 第32-37页 |
| ·基因枪转化载体的构建 | 第32-33页 |
| ·根癌农杆菌转化载体的构建 | 第33-37页 |
| ·由35SS启动子启动转录载体的构建 | 第33-34页 |
| ·由Ubi-1启动子启动转录载体的构建 | 第34-37页 |
| ·Ubi-1启动子启动转录载体中AFP／scFV基因的导入 | 第37页 |
| ·以manA为标记基因转化拟南芥 | 第37-42页 |
| ·筛选浓度的确定 | 第37-40页 |
| ·氯酚红显色法检测PMI活性 | 第40页 |
| ·转基因拟南芥的分子检测 | 第40-42页 |
| 5.讨论 | 第42-45页 |
| ·manA原核表达及苯酚红显色法 | 第42页 |
| ·manA作为单子叶植物遗传转化的选择标记 | 第42-43页 |
| ·manA作为十字花科植物遗传转化的选择标记 | 第43页 |
| ·拟南芥转化中甘露糖筛选浓度 | 第43-44页 |
| ·氯酚红显色法 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-53页 |
| 致谢 | 第53页 |