| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-17页 |
| 第一部分：一种新的β~0地贫基因的鉴定 | 第17-73页 |
| 第1章 引言 | 第17-23页 |
| 第2章 实验材料 | 第23-27页 |
| 2．1 仪器及生物学分析软件 | 第23页 |
| 2．2 试剂 | 第23-26页 |
| 2．3 标本 | 第26-27页 |
| 第3章 实验方法 | 第27-46页 |
| 3．1 鉴定β地贫新突变的研究策略 | 第27页 |
| 3．2 β地贫血液学表型分析 | 第27-28页 |
| 3．3 中国人β地贫24种突变的检测 | 第28-31页 |
| 3．3．1 外周血基因组DNA的制备 | 第28-29页 |
| 3．3．2 PCR扩增β-珠蛋白基因 | 第29-30页 |
| 3．3．3 反向点杂交(RDB)实验 | 第30-31页 |
| 3．4 β地贫新突变的发现和基因分型 | 第31-33页 |
| 3．4．1 DNA序列测定 | 第31-32页 |
| 3．4．2 RDB法用于新突变基因分型 | 第32-33页 |
| 3．5 mRNA水平的功能研究 | 第33-44页 |
| 3．5．1 总RNA的提取和质量鉴定 | 第33-35页 |
| 3．5．2 β-珠蛋白基因mRNA水平分析 | 第35-44页 |
| 3．6 β-珠蛋白基因簇单倍型分析 | 第44-46页 |
| 第4章 实验结果 | 第46-59页 |
| 4．1 先证者及其家庭成员血液学表型数据 | 第46-47页 |
| 4．2 β地贫新突变基因型鉴定 | 第47-50页 |
| 4．2．1 中国人β地贫24种突变分析结果 | 第47-48页 |
| 4．2．2 DNA序列测定结果 | 第48-49页 |
| 4．2．3 RDB法基因分型新突变 | 第49-50页 |
| 4．3 β地贫新突变mRNA水平分析结果 | 第50-56页 |
| 4．3．1 总RNA的质量鉴定 | 第50页 |
| 4．3．2 引物的质量鉴定 | 第50-51页 |
| 4．3．3 实时荧光定量RT-PCR反应的特异性评价 | 第51-53页 |
| 4．3．4 构建相对定量标准曲线 | 第53-54页 |
| 4．3．5 实验数据的标准化和mRNA相对定量结果 | 第54-56页 |
| 4．4 β地贫基因RFLP单倍型的确定 | 第56-59页 |
| 第5章 分析与讨论 | 第59-66页 |
| 5．1 β地贫表型与基因型分析 | 第59-60页 |
| 5．2 CDs15／16(+G)移码突变产生机理分析 | 第60-61页 |
| 5．3 CDs15／16(+G)移码突变的功能分析 | 第61-65页 |
| 5．3．1 实时荧光定量RT-PCR实验分析 | 第62-64页 |
| 5．3．2 β-珠蛋白mRNA水平降低的可能机制 | 第64-65页 |
| 5．4 β-珠蛋白基因簇单倍型分析 | 第65-66页 |
| 第6章 参考文献 | 第66-73页 |
| 第二部分 基于荧光偏振的高通量β地贫突变检测方法研究 | 第73-101页 |
| 第1章 引言 | 第73-78页 |
| 第2章 实验材料 | 第78-80页 |
| 2．1 仪器及生物学分析软件 | 第78页 |
| 2．2 试剂 | 第78-79页 |
| 2．3 样品 | 第79-80页 |
| 第3章 实验方法 | 第80-90页 |
| 3．1 方法学研究的技术路线 | 第80页 |
| 3．2 DNA样品的选择及制备 | 第80-82页 |
| 3．3 引物设计 | 第82-83页 |
| 3．4 PCR扩增β-珠蛋白基因的效率和特异性评价 | 第83-84页 |
| 3．5 SBE-FP法平行检测中国人β地贫8种突变 | 第84-87页 |
| 3．5．1 PCR扩增目的基因 | 第84-85页 |
| 3．5．2 残余引物和dNTP的降解 | 第85页 |
| 3．5．3 单碱基延伸(SBE)反应和荧光偏振(FP)检测 | 第85-87页 |
| 3．6 动力学实验优化SBE-FP反应条件 | 第87-88页 |
| 3．7 用SBE-FP法对阳性控制样品进行基因分型 | 第88页 |
| 3．8 盲法实验评价SEB-FP法的特异性 | 第88-90页 |
| 第4章 实验结果 | 第90-97页 |
| 4．1 PCR产物特异性评价 | 第90-91页 |
| 4．2 实验条件的优化结果 | 第91-94页 |
| 4．3 阳性控制样品基因分型结果 | 第94-96页 |
| 4．4 特异性评价实验 | 第96-97页 |
| 第5章 分析与讨论 | 第97-99页 |
| 第6章 参考文献 | 第99-101页 |
| 附录：英文缩写词中英文对照表 | 第101-103页 |
| 攻读博士学位期间(01．9—05．6)成果 | 第103-105页 |
| 致谢 | 第105-106页 |
| 第一军医大学 学位论文原创性声明 | 第106页 |
| 学位论文版权使用授权书 | 第106页 |
