人三叶因子3基因的合成及转化番茄的研究
| 引言 | 第1-21页 |
| 1 三叶因子的结构与功能 | 第8-15页 |
| ·HTFF3的概况 | 第8-10页 |
| ·HTFF3的结构 | 第10-11页 |
| ·HTFF3的功能 | 第11-13页 |
| ·HTFF3的作用机制及相关信号传导 | 第13-14页 |
| ·研究展望 | 第14-15页 |
| 2 利用植物生物反应器生产药用蛋白 | 第15-19页 |
| ·植物生物反应器的优点 | 第15-16页 |
| ·准确表达、正确组装重组蛋白质 | 第15页 |
| ·稳定、大量地生产转基因产品 | 第15页 |
| ·安全性 | 第15-16页 |
| ·几种常用的生产重组蛋白质的植物表达系统 | 第16页 |
| ·植物细胞基因组的遗传转化 | 第16页 |
| ·植物病毒表达载体 | 第16页 |
| ·用转基因植物生产疫苗 | 第16-17页 |
| ·用转基因植物生产重组抗体 | 第17页 |
| ·用转基因植物生产重组人类防御素 | 第17-18页 |
| ·植物生物反应器发展前景 | 第18-19页 |
| 3 本研究的目的和意义 | 第19-20页 |
| 4 技术路线 | 第20-21页 |
| 材料与方法 | 第21-40页 |
| 1 材料与试剂 | 第21-25页 |
| ·菌种和质粒 | 第21-22页 |
| ·常用酶和生化试剂 | 第22-24页 |
| ·分子生物学常用酶及试剂盒 | 第22-23页 |
| ·分子生物学常用生化试剂 | 第23-24页 |
| ·植物材料 | 第24页 |
| ·培养基 | 第24页 |
| ·主要仪器设备 | 第24-25页 |
| 2 方法 | 第25-40页 |
| ·基因合成 | 第25-30页 |
| ·单链片段的合成 | 第25页 |
| ·利用高保真DNA聚合酶合成2个亚片段 | 第25-26页 |
| ·连接产物回收 | 第26页 |
| ·引物的合成 | 第26页 |
| ·PCR连接 | 第26-27页 |
| ·PCR产物回收 | 第27页 |
| ·反应产物末端加A | 第27-28页 |
| ·扩增产物的克隆 | 第28-30页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第30-31页 |
| ·pBTF中间表达载体的构建 | 第30-31页 |
| ·切除GUS基因的线性化pBI121载体的制备 | 第30页 |
| ·线性化载体与hTFF3基因片段的连接 | 第30-31页 |
| ·pBTF重组载体的鉴定 | 第31页 |
| ·重组农杆菌介导的番茄遗传转化 | 第31-36页 |
| ·重组农杆菌工程菌株的构建 | 第31-34页 |
| ·重组农杆菌介导的番茄遗传转化 | 第34-36页 |
| ·播种 | 第34页 |
| ·Kan抗性敏感试验 | 第34-35页 |
| ·农杆菌侵染液的制备 | 第35页 |
| ·叶盘法转化番茄 | 第35页 |
| ·抗性愈伤组织筛选及出芽诱导 | 第35-36页 |
| ·转化植株的诱根培养 | 第36页 |
| ·转基因番茄植株检测 | 第36-40页 |
| ·PCR | 第36-37页 |
| ·Southern blot | 第37-38页 |
| ·RT-PCR | 第38-40页 |
| 结果与分析 | 第40-48页 |
| 1 HTFF3基因的合成 | 第40-41页 |
| ·PCR连接反应 | 第40页 |
| ·连接反应中酶的选择 | 第40-41页 |
| 2 pBTF植物表达载体的构建与鉴定 | 第41-43页 |
| 3 重组农杆菌工程菌株 | 第43-45页 |
| ·农杆菌电激转化 | 第43页 |
| ·重组农杆菌工程菌鉴定 | 第43-45页 |
| 4 番茄遗传转化 | 第45-48页 |
| ·农杆菌侵染液浓度及侵染时间对转化的影响 | 第45页 |
| ·番茄转化植株的筛选 | 第45-46页 |
| ·转基因番茄植株检测 | 第46-48页 |
| ·PCR检测 | 第46页 |
| ·Southern blot | 第46-47页 |
| ·RT-PCR检测 | 第47-48页 |
| 讨论 | 第48-52页 |
| 1 基因合成的方法 | 第48页 |
| 2 套叠PCR法在合成HTFF3基因中的应用 | 第48-50页 |
| ·反应程序设计 | 第48-49页 |
| ·反应中酶的选择 | 第49页 |
| ·反应产物的克隆 | 第49-50页 |
| 3 农杆菌侵染液浓度及侵染时间对转化的影响 | 第50页 |
| 4 HTFF3口服给药的可行性 | 第50-51页 |
| 5 转基因植物生产药用蛋白存在的问题 | 第51页 |
| 6 本研究的后续工作 | 第51-52页 |
| 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-57页 |
| 致谢 | 第57页 |
