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微小隐孢子虫CP15-P23-CP15/60三价亚单位疫苗和核酸疫苗的制备及其免疫保护性研究

摘要第1-8页
Abstract第8-14页
英文缩略表第14-15页
第一章 隐孢子虫病免疫机制研究进展第15-23页
   ·先天性免疫第15-18页
     ·肠黏膜上皮细胞第16页
     ·先天性免疫中的 IFN-γ和自然杀伤细胞第16-17页
     ·巨噬细胞和一氧化氮第17页
     ·树突状细胞第17页
     ·补体系统第17-18页
   ·获得性免疫第18-21页
     ·T 淋巴细胞第18页
     ·辅助性 T 淋巴细胞在对抗 C.parvum 感染过程中占主要地位第18-19页
     ·Th1 型细胞因子第19-20页
     ·Th2 型细胞因子第20页
     ·隐孢子虫感染的 B 细胞反应及抗体反应第20页
     ·抗隐孢子虫抗体的被动免疫第20-21页
   ·结论第21-23页
第二章 微小隐孢子虫 CP15-P23-CP15/60 基因及其主要抗原表位区的串联表达第23-47页
   ·实验材料第23-26页
     ·载体、菌株和基因组 DNA第23页
     ·实验动物第23页
     ·主要试剂第23-24页
     ·血清第24页
     ·主要仪器第24页
     ·主要试剂配制第24-26页
   ·实验方法第26-38页
     ·微小隐孢子虫 T 细胞抗原表位预测和筛选第26-27页
     ·引物的设计与合成第27-28页
     ·目的基因的 PCR 扩增及串联第28-31页
     ·原核表达质粒的构建与鉴定第31-34页
     ·重组质粒的诱导表达及纯化第34-37页
     ·重组蛋白的 Western blot 分析第37-38页
     ·重组蛋白的质谱色谱分析第38页
     ·鼠抗血清的制备及鉴定第38页
   ·实验结果第38-45页
     ·微小隐孢子虫 T 细胞抗原表位预测和筛选第38页
     ·目的基因的 PCR 扩增及串联第38-39页
     ·原核表达质粒 pET-28a-CP15-23-60 和 pET-CpTm 的鉴定第39-40页
     ·重组质粒 pET-28a-CP15-23-60 和 pET-CpTm 的诱导表达及纯化第40-43页
     ·重组蛋白的 Western blot 分析第43-44页
     ·重组蛋白的质谱色谱分析第44页
     ·鼠抗血清的鉴定第44-45页
   ·讨论第45-47页
第三章 两个微小隐孢子虫三价亚单位疫苗的动物免疫保护研究第47-63页
   ·实验材料第47-49页
     ·菌株与重组蛋白第47页
     ·实验动物与虫种第47页
     ·主要试剂第47-48页
     ·主要试剂的配制第48页
     ·主要仪器第48-49页
   ·实验方法第49-54页
     ·重组蛋白制备第49-51页
     ·动物分组和免疫第51页
     ·体液免疫水平的检测第51页
     ·细胞免疫水平的检测第51-53页
     ·攻虫感染第53-54页
   ·实验结果第54-61页
     ·体液免疫水平变化第54-56页
     ·CD4~+、CD8~+T 淋巴细胞数量变化第56-57页
     ·免疫小鼠脾淋巴细胞增殖试验结果第57-58页
     ·细胞因子检测结果分析第58-59页
     ·动物保护性试验第59-61页
   ·讨论第61-63页
第四章 两个微小隐孢子虫三价核酸疫苗的动物免疫保护研究第63-77页
   ·实验材料第63-64页
     ·质粒与重组蛋白第63页
     ·实验动物与虫种第63页
     ·主要试剂第63页
     ·主要试剂的配制第63-64页
     ·主要仪器第64页
   ·实验方法第64-67页
     ·引物的设计与合成第64页
     ·真核表达载体的构建及鉴定第64-65页
     ·重组质粒的大量提取和纯化第65-66页
     ·动物分组和免疫第66页
     ·体液免疫水平的检测第66页
     ·细胞免疫水平的检测第66-67页
     ·攻虫感染第67页
   ·实验结果第67-73页
     ·真核表达载体的构建及鉴定第67-68页
     ·体液免疫水平第68-69页
     ·细胞免疫水平第69-72页
     ·动物保护性试验第72-73页
   ·讨论第73-77页
第五章 全文结论第77-79页
参考文献第79-87页
致谢第87-89页
作者简介第89页

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