| 缩略语表 | 第1-11页 |
| 中文摘要 | 第11-13页 |
| 英文摘要 | 第13-15页 |
| 前言 | 第15-45页 |
| 文献回顾之一 肝癌抑癌基因与肿瘤关系研究进展 | 第20-31页 |
| 文献回顾之二 RNA干扰研究进展 | 第31-45页 |
| 正文 | 第45-125页 |
| 第一部分 NDRG2基因克隆、表达、纯化、复性及抗肿瘤作用研究 | 第45-88页 |
| 引言 | 第45页 |
| 1 NDRG2基因克隆、表达研究 | 第45-56页 |
| ·材料 | 第45-46页 |
| ·生化试剂和材料 | 第45页 |
| ·_72具酶和试剂盒 | 第45-46页 |
| ·质粒和菌株 | 第46页 |
| ·主要仪器和设备 | 第46页 |
| ·方法 | 第46-50页 |
| ·目的片段双酶切位点改造 | 第46-47页 |
| ·表达载体的构建 | 第47页 |
| ·M15感受态制备 | 第47-48页 |
| ·表达载体转化和阳性克隆鉴定 | 第48页 |
| ·将鉴定正确的阳性克隆做DNA测序 | 第48页 |
| ·表达量考察 | 第48页 |
| ·诱导表达条件的优化 | 第48-49页 |
| ·最佳超声破菌时间的考察 | 第49页 |
| ·真核表达系统构建 | 第49-50页 |
| ·结果 | 第50-56页 |
| ·DNA测序证实表达质粒构建正确 | 第50页 |
| ·酶切鉴定及诱导表达结果 | 第50-52页 |
| ·诱导表达条件优化结果 | 第52-54页 |
| ·最佳超声破菌时间考察结果 | 第54-55页 |
| ·溶解方法考察结果 | 第55页 |
| ·真核表达体系表达NDRG2的研究 | 第55-56页 |
| 2 NDRG2包涵体的复溶和三级纯化方法研究 | 第56-68页 |
| ·材料 | 第56-57页 |
| ·生化试剂 | 第56页 |
| ·主要仪器和设备 | 第56页 |
| ·层析填料 | 第56-57页 |
| ·方法 | 第57-59页 |
| ·NDRG2包涵体复溶方法研究 | 第57页 |
| ·复溶后包涵体溶液的浓缩方法研究 | 第57页 |
| ·纯化方法研究 | 第57-58页 |
| ·脱盐 | 第57页 |
| ·离子交换纯化研究 | 第57-58页 |
| ·亲和层析 | 第58页 |
| ·分子筛 | 第58页 |
| ·等电点测定 | 第58页 |
| ·N端氨基酸序列测定 | 第58-59页 |
| ·结果 | 第59-68页 |
| ·NDRG2包涵体复溶方法研究结果 | 第59页 |
| ·复溶后包涵体溶液的浓缩方法研究结果 | 第59-60页 |
| ·脱盐 | 第60页 |
| ·离子交换纯化研究 | 第60-66页 |
| ·亲和层析 | 第66-67页 |
| ·分子筛 | 第67页 |
| ·等电聚焦 | 第67-68页 |
| ·N端氨基酸序列测定 | 第68页 |
| 3 NDRG2蛋白的肿瘤抑制作用的初步研究 | 第68-82页 |
| ·材料 | 第68页 |
| ·方法 | 第68-70页 |
| ·血清浓度依赖性实 | 第68页 |
| ·NDRG2对肿瘤细胞的抑制性实验 | 第68-69页 |
| ·流式细胞术考察NDRG2的对7901和HHCC细胞周期的影响 | 第69页 |
| ·细胞增值计数 | 第69页 |
| ·软琼脂集落形成实验 | 第69-70页 |
| ·裸鼠致瘤抑制实验 | 第70页 |
| ·结果 | 第70-82页 |
| ·血清浓度依赖性实验结果 | 第70-71页 |
| ·7901细胞血清依赖性实验结果 | 第70页 |
| ·HHCC细胞血清依赖性实验结果 | 第70-71页 |
| ·NDRG2对肿瘤细胞的抑制性实验结果 | 第71-78页 |
| ·预实验结果 | 第71-73页 |
| ·带空白对照的抑制作用结果 | 第73-75页 |
| ·带空白及变性对照的抑制作用结果 | 第75-76页 |
| ·带空白对照及超滤上液和下液作对照的抑制作用结果 | 第76-78页 |
| ·流式细胞术考察NDRG2对7901和HHCC细胞周期的影响 | 第78-80页 |
| ·细胞增殖计数实验 | 第80-81页 |
| ·裸鼠致瘤抑制实验结果 | 第81-82页 |
| 4 讨论 | 第82-85页 |
| 小结 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-88页 |
| 第二部分 质粒介导的NDRG2shRNA和NDRG2表达载体在人肿瘤细胞HHCC中的表达及其对细胞的作用 | 第88-110页 |
| 引言 | 第88页 |
| 1 材料和方法 | 第88-99页 |
| ·材料 | 第88-90页 |
| ·主要培养基 | 第88-89页 |
| ·酶及试剂盒 | 第89页 |
| ·质粒、菌株和细胞 | 第89页 |
| ·生化试剂 | 第89-90页 |
| ·主要仪器设备 | 第90页 |
| ·实验方法 | 第90-99页 |
| ·pSNAV1-NDRG2质粒的构建 | 第90-93页 |
| ·pSNAV1-shRNA质粒的构建 | 第93-95页 |
| ·质粒转染HHCC及7901细胞 | 第95页 |
| ·检测RNAi对NDRG2表达的影响 | 第95-97页 |
| ·免疫印迹法 | 第97-98页 |
| ·细胞形态学观察 | 第98页 |
| ·细胞生长增殖能力测定 | 第98页 |
| ·PI染色分析细胞周期 | 第98-99页 |
| ·软琼脂集落形成试验 | 第99页 |
| ·裸鼠体内致瘤实验 | 第99页 |
| 2 结果 | 第99-105页 |
| ·pSNAV1-NDRG2质粒的构建结果 | 第99-100页 |
| ·pSNAV1-shRNA的构建结果 | 第100-400页 |
| ·转染细胞RT-PCR的结果 | 第400-101页 |
| ·荧光定量PCR的结果 | 第101-102页 |
| ·免疫印迹的结果 | 第102-103页 |
| ·PI染色分析细胞周期 | 第103-104页 |
| ·软琼脂集落生成试验 | 第104页 |
| ·裸鼠肿瘤生成试验 | 第104-105页 |
| 3 讨论 | 第105-107页 |
| 小结 | 第107-108页 |
| 参考文献 | 第108-110页 |
| 第三部分 HHCC细胞中NDRG2的表达和抑制对凋亡和肿瘤发生通路基因的影响 | 第110-125页 |
| 引言 | 第110页 |
| 1 材料和方法 | 第110-116页 |
| ·试剂 | 第110-111页 |
| ·实验方法 | 第111-116页 |
| ·pcDNA-GFP-shRNA质粒的构建 | 第111-114页 |
| ·pcDNA-GFP-NDRG2质粒的构建 | 第114页 |
| ·细胞转染 | 第114页 |
| ·RNA提取方法 | 第114-115页 |
| ·基因芯片杂交实验 | 第115-116页 |
| 2 结果 | 第116-119页 |
| ·pcDNA-shRNA-GFP的构建 | 第116-117页 |
| ·pcDNA-NDRG2-GFP的构建 | 第117页 |
| ·转染效果的荧光显微镜检测 | 第117-118页 |
| ·人细胞凋亡基因芯片检测结果 | 第118页 |
| ·人肿瘤发现者基因芯片检测结果 | 第118-119页 |
| 3 讨论 | 第119-121页 |
| 小结 | 第121-122页 |
| 参考文献 | 第122-125页 |
| 个人简历 | 第125-127页 |
| 致谢 | 第127-128页 |
| 附录 | 第128-167页 |
