| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-11页 |
| 1 引言 | 第11-22页 |
| ·猪瘟的起源及其危害 | 第11页 |
| ·猪瘟病毒(CSFV)的分子生物学特征 | 第11-12页 |
| ·CSFV的基因组结构 | 第12-13页 |
| ·CSFV的结构蛋白 | 第13-16页 |
| ·猪瘟疫苗研究进展 | 第16-19页 |
| ·CSFV基因标记疫苗 | 第17页 |
| ·以痘苗病毒为载体的CSFV基因工程疫苗 | 第17-18页 |
| ·以伪狂犬病毒为载体的CSFV基因工程苗 | 第18页 |
| ·以杆状病毒为载体的猪瘟病毒基因工程疫苗 | 第18-19页 |
| ·核酸疫苗 | 第19页 |
| ·研究目的及意义 | 第19-22页 |
| ·毕赤酵母表达系统表达E2基因的可行性 | 第20-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-36页 |
| ·材料 | 第22-24页 |
| ·病毒 | 第22页 |
| ·质粒与菌株 | 第22页 |
| ·引物 | 第22页 |
| ·试剂 | 第22-23页 |
| ·试验主要仪器设备 | 第23-24页 |
| ·试验方法 | 第24-27页 |
| ·病毒的增殖 | 第24页 |
| ·病毒核酸(总RNA)的提取 | 第24页 |
| ·CSFV基因组cDNA的合成 | 第24页 |
| ·CSFV E2基因的PCR扩增 | 第24-25页 |
| ·0.8％琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物 | 第25页 |
| ·CSFV E2基因片段的胶回收纯化 | 第25页 |
| ·纯化后的目的片段与pMD18-T载体连接 | 第25-26页 |
| ·连接产物的转化 | 第26页 |
| ·重组质粒T-E2的鉴定 | 第26-27页 |
| ·CSFV E2基因的序列测定及分析 | 第27页 |
| ·酵母重组表达载体pPIC9-E2的构建 | 第27-30页 |
| ·表达载体pPIC9的扩增 | 第27-28页 |
| ·表达载体pPIC9和重组质粒T-E2的EcoR Ⅰ／Not Ⅰ双酶切 | 第28-29页 |
| ·表达载体pPIC9和重组质粒T-E2双酶切产物的胶回收纯化 | 第29页 |
| ·E2基因片段与表达载体pPIC9连接 | 第29页 |
| ·连接产物的转化 | 第29页 |
| ·重组质粒pPIC9-E2双酶切及PCR鉴定 | 第29-30页 |
| ·CSFV E2基因在毕赤酵母GS115中的表达 | 第30-34页 |
| ·空载体pPIC9和重组表达载体pPIC9-E2的Sal Ⅰ单酶切线性化及纯化 | 第30页 |
| ·毕赤酵母(P.Pastotis)GS115的培养及制备转化菌 | 第30页 |
| ·电转化 | 第30-31页 |
| ·阳性转化子Mut表型鉴定 | 第31页 |
| ·转化子GS115-pPIC9-E2的PCR鉴定 | 第31-32页 |
| ·阳性转化子GS115-pPIC9-E2的表达 | 第32页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析 | 第32-33页 |
| ·免疫印迹(Western-blot)分析 | 第33-34页 |
| ·免疫酶斑点技术(Dot-ELISA)分析 | 第34页 |
| ·最佳表达条件的选择 | 第34-35页 |
| ·试验设计 | 第34页 |
| ·不同试验条件下的酵母菌表达 | 第34-35页 |
| ·重组E2蛋白的表达效率分析及表达量的计算 | 第35-36页 |
| 3 结果 | 第36-43页 |
| ·CSFV HL-LY株E2基因的克隆与序列分析 | 第36-38页 |
| ·RT-PCR扩增CSFV E2基因结果 | 第36页 |
| ·重组质粒T-E2的酶切及PCR鉴定结果 | 第36-37页 |
| ·CSFV HL-LY株E2基因的测序与序列分析结果 | 第37-38页 |
| ·CSFV HL-LY株E2基因重组表达载体pPIC9-E2的构建 | 第38页 |
| ·重组表达载体pPIC9-E2的酶切及PCR鉴定结果 | 第38页 |
| ·CSFV HL-LY株E2基因在毕赤酵母中的表达 | 第38-43页 |
| ·阳性转化子Mut表型的鉴定结果 | 第38-39页 |
| ·阳性转化子GS115-pPIC9-E2的PCR鉴定结果 | 第39页 |
| ·转化子GS115-pPIC9-E2 PCR产物的测序结果 | 第39-40页 |
| ·毕赤酵母GS115表达CSFV E2蛋白SDS-PAGE电泳结果 | 第40页 |
| ·免疫印迹结果 | 第40-41页 |
| ·免疫酶斑点技术(Dot-ELISA)分析结果 | 第41页 |
| ·重组E2蛋白表达条件的优化结果 | 第41-42页 |
| ·重组蛋白E2表达效率分析结果及表达量 | 第42-43页 |
| 4 讨论 | 第43-48页 |
| ·CSFV HL-LY地方株E2基因与国内外同源毒株E2基因序列的比较分析 | 第43页 |
| ·毕赤酵母表达系统是CSFV E2蛋白理想的表达系统 | 第43-45页 |
| ·不同外界条件对毕赤酵母表达CSFV E2蛋白产量的影响 | 第45-48页 |
| 5 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-54页 |
| 附录 | 第54-63页 |
| 攻读硕士期间发表的学术论文 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
