| 致谢 | 第1-5页 |
| 中文摘要 | 第5-10页 |
| 前言 | 第10-18页 |
| 第一部分 文献综述及本研究的内容和技术路线 | 第18-69页 |
| 第一章 蜜蜂和胡蜂蜂毒的研究进展 | 第19-64页 |
| 1． 蜜蜂蜂毒的研究进展 | 第19-29页 |
| 1．1 蜜蜂蜂毒的来源和理化性质 | 第19-21页 |
| 1．2 蜜蜂蜂毒的组成 | 第21-25页 |
| 1．3 蜜蜂蜂毒的作用研究 | 第25-29页 |
| 2． 胡蜂蜂毒的研究进展 | 第29-40页 |
| 2．1 胡蜂蜂毒与蜜蜂蜂毒来源的比较 | 第30页 |
| 2．2 胡蜂蜂毒的主要成份 | 第30-37页 |
| 2．3 胡蜂蜂毒的作用 | 第37-40页 |
| 2．4 展望 | 第40页 |
| 3． 蜂毒明肽的研究进展 | 第40-46页 |
| 3．1 明肽的化学结构 | 第41-42页 |
| 3．2 明肽的药理作用 | 第42-44页 |
| 3．3 明肽的分子生物学研究 | 第44-46页 |
| 4． 肥大细胞脱粒肽研究进展 | 第46-54页 |
| 4．1 肥大细胞脱粒肽的化学结构 | 第46-48页 |
| 4．2 MCDP的药理作用 | 第48-52页 |
| 4．3 MCDP基因的克隆研究 | 第52-54页 |
| 5． 蜂毒镇静肽的研究进展 | 第54-56页 |
| 5．1 镇静肽的化学结构 | 第54页 |
| 5．2 镇静肽的毒性研究 | 第54-55页 |
| 5．3 镇静肽的分子生物学研究 | 第55-56页 |
| 6． 蜂毒过敏原抗原5的研究进展 | 第56-64页 |
| 6．1 蜂毒过敏原Ag5的一般介绍 | 第56页 |
| 6．2 蜂毒Ag5蛋白的鉴定、基因的克隆和表达 | 第56-58页 |
| 6．3 蜂毒Ag5蛋白的晶体结构与相关蛋白的结构关系 | 第58-61页 |
| 6．4 蜂毒Ag5蛋白的免疫学研究 | 第61-62页 |
| 6．5 展望 | 第62-64页 |
| 第二章 研究内容和技术路线 | 第64-69页 |
| 1． 研究内容 | 第64页 |
| 2． 研究拟解决的关键问题 | 第64-65页 |
| 3． 研究的技术路线 | 第65-69页 |
| 3．1 蜂毒明肽、镇静肽、肥大细胞脱粒肽和过敏原抗原5基因的克隆和测序 | 第66-67页 |
| 3．2 蜂毒明肽、镇静肽、肥大细胞脱粒肽和过敏原抗原5基因在大肠杆菌中的表达及多克隆抗体的制备 | 第67-68页 |
| 3．3 蜂毒明肽、镇静肽、肥大细胞脱粒肽和过敏原抗原5基因在昆虫细胞中的表达与鉴定 | 第68-69页 |
| 第二部分 蜂毒明肽基因的克隆与表达 | 第69-90页 |
| 第三章 2种蜜蜂和4种胡蜂蜂毒前明肽原基因的克隆和序列分析 | 第70-76页 |
| 1． 材料和方法 | 第70-72页 |
| 1．1 材料 | 第70-71页 |
| 1．2 方法 | 第71-72页 |
| 2． 结果与分析 | 第72-74页 |
| 2．1 RT-PCR扩增2种蜜蜂和4种胡蜂蜂毒前明肽原基因 | 第72页 |
| 2．2 PCR产物克隆入pGEM（?）-T easy载体 | 第72-73页 |
| 2．3 序列分析 | 第73-74页 |
| 3． 讨论 | 第74-76页 |
| 第四章 中华蜜蜂蜂毒前明肽原及明肽基因的克隆和在大肠杆菌中的高效表达 | 第76-84页 |
| 1． 材料和方法 | 第76-78页 |
| 1．1 蜜蜂和试剂 | 第76页 |
| 1．2 方法 | 第76-78页 |
| 2． 结果与分析 | 第78-83页 |
| 2．1 3’RACE扩增中蜂蜂毒前明肽原基因 | 第78-79页 |
| 2．2 PCR产物克隆和序列分析 | 第79页 |
| 2．3 原核表达载体的构建 | 第79-81页 |
| 2．4 SDS-PAGE分析 | 第81-82页 |
| 2．5 Western blot分析 | 第82页 |
| 2．6 明肽融和蛋白的纯化与酶切 | 第82-83页 |
| 3． 讨论 | 第83-84页 |
| 第五章 中华蜜蜂蜂毒明肽基因在Bac-to-Bac杆状病毒-昆虫系统中的表达 | 第84-90页 |
| 1． 材料和方法 | 第84-86页 |
| 1．1 材料和试剂 | 第84-85页 |
| 1．2 方法 | 第85-86页 |
| 2． 结果与分析 | 第86-89页 |
| 2．1 重组杆状病毒转移载体的构建 | 第86-87页 |
| 2．2 重组Bacmid DNA的获得 | 第87页 |
| 2．3 重组Bacmid转染昆虫细胞及病毒扩增 | 第87-88页 |
| 2．4 SDS-PAGE分析 | 第88页 |
| 2．5 Western印迹分析 | 第88-89页 |
| 3． 讨论 | 第89-90页 |
| 第三部分 蜂毒镇静肽基因的克隆与表达 | 第90-114页 |
| 第六章 2种蜜蜂和4种胡蜂蜂毒前镇静肽原基因的克隆及序列分析 | 第91-99页 |
| 1． 材料和方法 | 第91-92页 |
| 1．1 材料 | 第91-92页 |
| 1．2 方法 | 第92页 |
| 2． 结果与分析 | 第92-96页 |
| 2．1 RT-PCR扩增2种蜜蜂和4种胡蜂蜂毒前镇静肽原基因 | 第92-93页 |
| 2．2 PCR产物克隆入pGEM（?）-T easy载体 | 第93页 |
| 2．3 序列分析 | 第93-96页 |
| 3． 讨论 | 第96-99页 |
| 第七章 中华蜜蜂蜂毒镇静肽基因的cDNA克隆和在大肠杆菌中的高效表达 | 第99-105页 |
| 1． 材料与方法 | 第99-100页 |
| 1．1 蜜蜂和试剂 | 第99页 |
| 1．2 方法 | 第99-100页 |
| 2． 结果与分析 | 第100-103页 |
| 2．1 3’RACE和镇静肽原核表达载体的构建 | 第100-101页 |
| 2．2 SDS-PAGE分析 | 第101-102页 |
| 2．3 Western blot分析 | 第102-103页 |
| 2．4 镇静肽融合蛋白的纯化与酶切 | 第103页 |
| 3． 讨论 | 第103-105页 |
| 第八章 用Bac-to-Bac杆状病毒-昆虫系统高效表达绿色荧光标记的中华蜜蜂蜂毒镇静肽基因 | 第105-114页 |
| 1． 材料和方法 | 第105-106页 |
| 1．1 材料和试剂 | 第105页 |
| 1．2 方法 | 第105-106页 |
| 2． 结果与分析 | 第106-111页 |
| 2．1 重组杆状病毒转移载体的构建 | 第106-107页 |
| 2．2 重组病毒DNA的获得 | 第107页 |
| 2．3 rBacmid/EGFP-AccSecapin转染昆虫细胞及病毒扩增 | 第107-108页 |
| 2．4 重组病毒表达时相的分析 | 第108-110页 |
| 2．5 SDS-PAGE和Western印迹分析 | 第110-111页 |
| 3． 讨论 | 第111-114页 |
| 第四部分 蜂毒肥大细胞脱粒肽基因的克隆与表达 | 第114-136页 |
| 第九章 2种蜜蜂和3种胡蜂蜂毒肥大细胞脱粒肽cDNA的克隆及同源性分析 | 第115-121页 |
| 1． 材料和方法 | 第115-116页 |
| 1．1 材料 | 第115页 |
| 1．2 方法 | 第115-116页 |
| 2． 结果与分析 | 第116-119页 |
| 2．1 RT-PCR扩增2种蜜蜂和3种胡蜂蜂毒前肥大细胞脱粒肽原基因 | 第116页 |
| 2．2 PCR产物克隆入pGEM（?）-T easy载体 | 第116-117页 |
| 2．3 序列分析 | 第117-119页 |
| 3． 讨论 | 第119-121页 |
| 第十章 中华蜜蜂和墨胸胡蜂蜂毒肥大细胞脱粒肽基因在大肠杆菌中的高效表达与鉴定 | 第121-130页 |
| 1． 材料与方法 | 第121-123页 |
| 1．1 材料与试剂 | 第121页 |
| 1．2 方法 | 第121-123页 |
| 2． 结果与分析 | 第123-127页 |
| 2．1 PCR的克隆与序列测定 | 第123页 |
| 2．2 肥大细胞脱粒肽表达载体的构建及序列测定 | 第123-124页 |
| 2．3 SDS-PAGE分析 | 第124页 |
| 2．4 Western blot分析 | 第124-125页 |
| 2．5 肥大细胞脱粒肽融和蛋白的纯化与酶切 | 第125-126页 |
| 2．6 多克隆抗体的制备及抗原性检测 | 第126-127页 |
| 3． 讨论 | 第127-130页 |
| 第十一章 中华蜜蜂蜂毒和墨胸胡蜂蜂毒MCDP基因在粉纹夜蛾细胞中的高效表达及检测 | 第130-136页 |
| 1． 材料和方法 | 第130-131页 |
| 1．1 材料和试剂 | 第130页 |
| 1．2 方法 | 第130-131页 |
| 2． 结果与分析 | 第131-134页 |
| 2．1 重组杆状病毒转移载体的构建 | 第131-132页 |
| 2．2 重组Bacmid DNA的获得 | 第132页 |
| 2．3 重组Bacmid转染昆虫细胞及病毒扩增 | 第132-133页 |
| 2．4 SDS-PAGE分析 | 第133-134页 |
| 2．5 Western印迹分析 | 第134页 |
| 3． 讨论 | 第134-136页 |
| 第五部分 蜂毒过敏原抗原5基因的克隆与表达 | 第136-163页 |
| 第十二章 额斑黄胡蜂蜂毒过敏原抗原5前体基因的克隆和序列分析 | 第137-147页 |
| 1． 材料和方法 | 第137-138页 |
| 1．1 材料 | 第137页 |
| 1．2 方法 | 第137-138页 |
| 2． 结果与分析 | 第138-145页 |
| 2．1 RT-PCR扩增额斑黄胡蜂蜂毒过敏原抗原5前体基因 | 第138-139页 |
| 2．2 PCR产物克隆入pGEM（?）-T easy载体 | 第139页 |
| 2．3 序列分析 | 第139-145页 |
| 3． 讨论 | 第145-147页 |
| 第十三章 额斑黄胡蜂蜂毒过敏原抗原5及其前体基因在大肠杆菌中的表达及抗体制备 | 第147-155页 |
| 1． 材料与方法 | 第147-149页 |
| 1．1 材料与试剂 | 第147页 |
| 1．2 方法 | 第147-149页 |
| 2． 结果与分析 | 第149-152页 |
| 2．1 PCR的克隆与序列测定 | 第149页 |
| 2．2 抗原5及前体基因表达载体的构建及序列测定 | 第149-150页 |
| 2．3 SDS-PAGE分析 | 第150页 |
| 2．4 Western blot分析 | 第150-151页 |
| 2．5 抗原5融合蛋白的纯化 | 第151页 |
| 2．6 多克隆抗体的制备及抗原性检测 | 第151-152页 |
| 2．7 Western blot鉴定 | 第152页 |
| 3． 讨论 | 第152-155页 |
| 第十四章 额斑黄胡蜂抗原5在Bac-to-Bac杆状病毒-昆虫系统中的高效表达 | 第155-163页 |
| 1． 材料和方法 | 第155-156页 |
| 1．1 材料和试剂 | 第155页 |
| 1．2 方法 | 第155-156页 |
| 2． 结果与分析 | 第156-160页 |
| 2．1 重组杆状病毒转移载体的构建 | 第156-157页 |
| 2．2 重组病毒DNA的获得 | 第157页 |
| 2．3 rBacmid/EGFP-VmacAg5转染昆虫细胞及病毒扩增 | 第157-158页 |
| 2．4 重组病毒表达时相的分析 | 第158-159页 |
| 2．5 SDS-PAGE和Western印迹分析 | 第159-160页 |
| 3． 讨论 | 第160-163页 |
| 第六部分 总结 | 第163-170页 |
| 第十五章 总结 | 第164-170页 |
| 1． 本研究的主要结论 | 第164-168页 |
| 1．1 蜂毒明肽基因的克隆与表达 | 第164页 |
| 1．2 蜂毒镇静肽基因的克隆与表达 | 第164-166页 |
| 1．3 蜂毒肥大细胞脱粒肽基因的克隆与表达 | 第166-167页 |
| 1．4 额斑黄胡蜂蜂毒过敏原抗原5基因的克隆和表达 | 第167-168页 |
| 2． 本研究的主要创新点 | 第168页 |
| 3． 研究展望 | 第168-170页 |
| 参考文献 | 第170-184页 |
| 英文摘要 | 第184-190页 |
| 附章A 中华蜜蜂明肽、镇静肽及额班黄胡蜂过敏原抗原5基因在昆虫细胞中的表达 | 第190-196页 |
| 附章B 中华蜜蜂前明肽原、前镇静肽原及额班黄胡蜂过敏原抗原5前体基因在昆虫细胞系统中的表达 | 第196-203页 |
| 附录一 攻读博士学位期间发表的论文和受理的专利 | 第203-204页 |
| 附录二 材料和方法补充 | 第204-213页 |
