| 中文摘要 | 第1-13页 |
| 前言 | 第13-17页 |
| 第一部分 逆转录病毒介导的嵌合性T细胞受体转移系统的构建 | 第17-37页 |
| 一、 材料 | 第17-19页 |
| （一） 质粒和细菌 | 第17页 |
| （二） 主要试剂及配制 | 第17-19页 |
| （三） 主要仪器 | 第19页 |
| 二、 方法 | 第19-25页 |
| （一） 核苷酸引物设计 | 第19-20页 |
| （二） 限制性内切酶分析质粒DNA | 第20页 |
| （三） 低熔点琼脂糖凝胶回收DNA片段 | 第20页 |
| （四） 目的DNA片段与质粒DNA连接 | 第20-21页 |
| （五） 大肠杆菌感受态细胞制备及转化 | 第21页 |
| （六） 质粒DNA提取 | 第21-22页 |
| （七） 重组逆转录病毒载体pMSCVneo-Vhγ构建 | 第22-25页 |
| （八） 重组逆转录病毒载体pMSCVhyg-GFP构建 | 第25页 |
| 三、 结果 | 第25-34页 |
| （一） pGEM-Te-V载体的鉴定 | 第25-29页 |
| （二） pGEM-Te-hγ载体的鉴定 | 第29-32页 |
| （三） 重组pGEM-Te-Vhγ的鉴定 | 第32-33页 |
| （四） 重组逆转录病毒载体pMSCVneo-Vhγ的酶切鉴定 | 第33页 |
| （五） 重组逆转录病毒载体pMSCVhyg-GFP的酶切鉴定 | 第33-34页 |
| 四、 讨论 | 第34-37页 |
| （一） VEGF121-hinger-FcRγ的设计原则 | 第34页 |
| （二） 逆转录病毒转移系统的选择 | 第34-35页 |
| （三） 重叠延伸方法合成hinger-FcRγ | 第35页 |
| （四） 重组VEGF121-hinger-FcRγ过程中产生的同义突变 | 第35-37页 |
| 第二部分 表达嵌合性T细胞受体的肿瘤浸润淋巴细胞的制备及体外杀伤靶细胞的实验 | 第37-61页 |
| 一、 材料 | 第37-40页 |
| （一） 细胞株 | 第37页 |
| （二） 主要试剂及配制 | 第37-39页 |
| （三） 主要仪器 | 第39-40页 |
| 二、 方法 | 第40-45页 |
| （一） 细胞培养 | 第40页 |
| （二） G418、Hygromycin致死剂量的确定 | 第40-41页 |
| （三） 重组逆转录病毒载体包装 | 第41-42页 |
| （四） 肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）的分离、培养及激活 | 第42页 |
| （五） 重组逆转录病毒感染TIL细胞 | 第42-43页 |
| （六） RT-PCR检测目的基因转录 | 第43-44页 |
| （七） MTT法检测各种TIL细胞杀伤靶细胞活性 | 第44-45页 |
| 三、 结果 | 第45-52页 |
| （一） 产生的病毒滴度 | 第45页 |
| （二） MSCVhyg-GFP-TIL细胞表达绿色荧光蛋白 | 第45-46页 |
| （三） RT-PCR鉴定目的基因转录 | 第46页 |
| （四） 靶细胞数与OD570nm值的相关性 | 第46-47页 |
| （五）3 种TIL细胞对4种靶细胞的杀伤活性 | 第47-52页 |
| 四、 讨论 | 第52-56页 |
| （一） 影响重组逆转录病毒感染TIL细胞的因素 | 第52-53页 |
| （二） MTT比色法用于检测效应细胞对靶细胞杀伤率 | 第53页 |
| （三） 肿瘤血管内皮作为肿瘤治疗靶的优越性 45 | 第53-54页 |
| （四） VEGF-hinger-FcRγ可介导T细胞选择性杀伤KDR表达阳性细胞 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-61页 |
| 综述 | 第61-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
