鸡胚体节发育过程中的基因表达图式分析及特异基因的分离
中文摘要 | 第1-3页 |
英文摘要 | 第3-7页 |
第一章 前言 | 第7-19页 |
(一) 鸡胚早期发育的细胞和分子生物学基础 | 第7-13页 |
(二) 筛选差异表达基因的方法 | 第13-19页 |
第二章 材料和方法 | 第19-34页 |
(一) 鸡胚亨氏结、体节板和体节的获得 | 第19页 |
(二) RNA的提取 | 第19页 |
(三) mRNA差异显示 | 第19-22页 |
Ⅰ cDNA第一链的合成 | 第20-21页 |
Ⅱ 同位素PCR | 第21页 |
Ⅲ 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和放射性自显影 | 第21-22页 |
Ⅳ 差异片段的回收和再次PCR扩增 | 第22页 |
(四) 琼脂糖中DNA的快速回收 | 第22-23页 |
(五) 差异片段的克隆 | 第23-25页 |
Ⅰ 连接反应 | 第23页 |
Ⅱ 感受态细胞的制备 | 第23-24页 |
Ⅲ 质粒DNA的转化 | 第24页 |
Ⅳ 质粒的提取 | 第24-25页 |
Ⅴ 酶切鉴定 | 第25页 |
Ⅵ 差异片段的测序及序列比较 | 第25页 |
(六) 差异片段的鉴定(Northern杂交) | 第25-27页 |
Ⅰ RNA提取 | 第25页 |
Ⅱ RNA乙二醛-DMSO变性电泳 | 第25-26页 |
Ⅲ 转膜 | 第26页 |
Ⅳ 制备探针 | 第26-27页 |
Ⅴ 杂交 | 第27页 |
(七) 代表性差示分析 | 第27-31页 |
(八) 改进RDA | 第31-33页 |
(九) 反向Northern杂交 | 第33-34页 |
第三章 结果 | 第34-48页 |
(一) 鸡胚亨氏结、体节板和体节的获得 | 第34页 |
(二) RNA提取 | 第34-35页 |
(三) mRNA差异显示 | 第35-41页 |
3.1 亨氏结、体节扳和体节的基因表达图式分析 | 第35-37页 |
3.2 差异片段的回收和再次PCR扩增 | 第37页 |
3.3 差异片段的克隆 | 第37-38页 |
3.4 差异片段的序列分析 | 第38-41页 |
3.5 差异片段的Northern鉴定 | 第41页 |
(四) 代表性差示分析法 | 第41-42页 |
(五) 改进RDA方法 | 第42-45页 |
(六) 反向Northern杂交 | 第45-48页 |
第四章 讨论 | 第48-54页 |
(一) mRNA差异显示 | 第48-50页 |
(二) 代表性差示分析法 | 第50-51页 |
(三) 改进RDA | 第51-52页 |
(四) 亨氏结、体节板和体节的基因表达图谱 | 第52-54页 |
结论 | 第54-55页 |
参考文献 | 第55-59页 |
致谢 | 第59页 |