组织工程化静脉瓣构建的关键技术
| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-17页 |
| 英文缩写表 | 第17-19页 |
| 绪言 | 第19-21页 |
| 第一部分 同步培养兔骨髓源性EPCs和SPCs | 第21-45页 |
| 一、 前言 | 第21-22页 |
| 二、 试剂和仪器设备 | 第22-24页 |
| （一） 试剂 | 第22-23页 |
| （二） 仪器设备 | 第23-24页 |
| （三） 主要试剂的配制 | 第24页 |
| （四） 耗材 | 第24页 |
| 三、 方法 | 第24-31页 |
| （一） 实验动物来源与麻醉 | 第24-25页 |
| （二） 兔EPC、SPC体外分离培养 | 第25-27页 |
| 1 兔骨髓血单个核细胞的分离 | 第25页 |
| 2 兔EPCs、SPCs原代培养 | 第25-26页 |
| 3 兔EPCs、SPCs传代培养 | 第26页 |
| 4 细胞的冻存与复苏 | 第26-27页 |
| 5 台盼蓝染色细胞计数 | 第27页 |
| （三） 细胞爬片的制备 | 第27-28页 |
| （四） 兔EPCs、SPCs细胞鉴定 | 第28-30页 |
| 1 相差显微镜下观察细胞形态学特征 | 第28页 |
| 2 免疫细胞化学 | 第28-29页 |
| 3 细胞生物学功能检测 | 第29页 |
| 4 细胞透射电镜检测 | 第29-30页 |
| （五） 统计学处理 | 第30-31页 |
| 四、 结果 | 第31-38页 |
| （一） 冻存细胞复苏 | 第31页 |
| （二） 相差显微镜下EPCs、SPCs细胞形态 | 第31-33页 |
| （三） EPCs、SPCs细胞免疫化学 | 第33-35页 |
| （四） EPC、SPC透射电镜 | 第35-36页 |
| （五） 细胞生物学功能检测 | 第36-38页 |
| 1 吞脂试验 | 第36-37页 |
| 2 细胞在Matrigel上成血管试验 | 第37-38页 |
| 五、 讨论 | 第38-42页 |
| 1 EPCs、SPCs的来源 | 第38页 |
| 2 EPCs、SPCs的分离 | 第38-39页 |
| 3 EPCs、SPCs的诱导培养 | 第39-40页 |
| 4 EPCs、SPCs的鉴定 | 第40-42页 |
| 参考文献 | 第42-45页 |
| 第二部分 不同方法制备带瓣膜静脉瓣脱细胞支架 | 第45-60页 |
| 一、 前言 | 第45-46页 |
| 二、 试验仪器设备和试剂 | 第46-48页 |
| （一） 试剂 | 第46-47页 |
| （二） 实验设备 | 第47-48页 |
| （三） 主要试剂的配置 | 第48页 |
| 三、 方法 | 第48-52页 |
| （一） 血管材料收集 | 第48页 |
| （二） 带瓣膜静脉脱细胞支架制备 | 第48-49页 |
| （三） 脱细胞支架性能检测 | 第49-52页 |
| 1 石蜡切片的制备 | 第49-50页 |
| 2 HE染色 | 第50页 |
| 3 扫描电镜 | 第50-51页 |
| 4 DAPI荧光染色 | 第51页 |
| 5 透射电镜 | 第51页 |
| 6 细胞相溶性 | 第51-52页 |
| 四、 结果 | 第52-56页 |
| （一） 大体形态观察 | 第52页 |
| （二） 脱细胞支架HE染色 | 第52-53页 |
| （三） 扫描电镜 | 第53-54页 |
| （四） 透射电镜 | 第54-55页 |
| （五） DAPI荧光染色 | 第55页 |
| （六） 细胞相溶性 | 第55-56页 |
| 五、 讨论 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-60页 |
| 第三部分 平滑肌细胞种植器构建组织工程化静脉瓣 | 第60-75页 |
| 一、 前言 | 第60-61页 |
| 二、 试剂和仪器设备 | 第61-63页 |
| （一） 试剂 | 第61-62页 |
| （二） 仪器设备 | 第62-63页 |
| （三） 主要试剂的配制 | 第63页 |
| 三、 方法 | 第63-68页 |
| （一） 平滑肌细胞种植器构建组织工程化静脉瓣 | 第63-66页 |
| 1 平滑肌细胞种植器的研制 | 第63-64页 |
| 2 犬带瓣膜静脉脱细胞支架材料的制备 | 第64页 |
| 3 平滑肌细胞种植器种植SPCs | 第64-65页 |
| 4 EPCs种植 | 第65-66页 |
| （二） 加压灌注、多点注射法种植SPCs | 第66页 |
| （三） 组织工程化静脉瓣构建效果的检测 | 第66-68页 |
| 1 DAPI荧光染色 | 第66页 |
| 2 甲苯胺蓝染色 | 第66-67页 |
| 3 扫描电镜 | 第67页 |
| 4 MTT法 | 第67页 |
| 5 组织学检查 | 第67-68页 |
| 6 透射电镜 | 第68页 |
| 四、 结果 | 第68-72页 |
| （一） DAPI荧光染色 | 第68-69页 |
| （二） 甲苯胺蓝染色 | 第69页 |
| （三） 扫描电镜 | 第69-70页 |
| （四） MTT法测定种植结果 | 第70-71页 |
| （五） 透射电镜 | 第71页 |
| （六） 组织学检查 | 第71-72页 |
| 五、 讨论 | 第72-74页 |
| 1 细胞种植器 | 第72页 |
| 2 种子细胞在支架材料上的评价 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-75页 |
| 全文小结 | 第75页 |
| 本课题的创新点 | 第75页 |
| 本课题的意义 | 第75-76页 |
| 文献综述 | 第76-81页 |
| 1 脱细胞支架的结构和性能 | 第76-77页 |
| 2 脱细胞支架材料的制备方法 | 第77-79页 |
| 3 脱细胞支架材料在体内的动态变化 | 第79-81页 |
| 参考文献 | 第81-83页 |
| 在读期间发表论文、申请基金和奖励 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
