| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-15页 |
| 1 研究背景 | 第15-28页 |
| ·细胞周期检验点概述 | 第15-20页 |
| ·纺锤体装配检验点 | 第16-18页 |
| ·纺锤体装配检验点的激活机制 | 第18-20页 |
| ·纺锤体装配检验点激活的相关蛋白 | 第20-24页 |
| ·纺锤体装配检验点蛋白作用概述 | 第20页 |
| ·泛素连接酶APC 的促后期成熟机制 | 第20-21页 |
| ·纺锤体装配检验点关键蛋白BUBR1 和MAD2 | 第21-22页 |
| ·抑制APC 活性的有丝分裂期检验点复合体MCC | 第22-24页 |
| ·目前临床化疗药物的治疗效果及所存在的问题 | 第24-26页 |
| ·化疗药物PACLITAXEL 及阿霉素的介绍 | 第24-25页 |
| ·乳腺癌治疗中的PACLITAXEL 联合阿霉素的“新辅助治疗” | 第25页 |
| ·多药耐药现象 | 第25页 |
| ·逆转多药耐药的研究进展 | 第25-26页 |
| ·先天性小头畸形病 | 第26-28页 |
| ·MCPH1 | 第26-27页 |
| ·ASPM，CENPJ，STIL | 第27页 |
| ·CDK5RAP2 | 第27-28页 |
| 2 实验材料与方法 | 第28-43页 |
| ·材料与试剂 | 第28-32页 |
| ·试剂 | 第28-29页 |
| ·实验用耗材及仪器 | 第29页 |
| ·抗体 | 第29-30页 |
| ·兔抗多克隆抗体 | 第29-30页 |
| ·鼠抗单克隆抗体 | 第30页 |
| ·细胞系和药品用量 | 第30-31页 |
| ·细胞系 | 第30页 |
| ·药品用量 | 第30页 |
| ·药物配方 | 第30-31页 |
| ·质粒构建 | 第31-32页 |
| ·实验方法 | 第32-43页 |
| ·载体构建 | 第32-34页 |
| ·PCR 扩增 | 第32页 |
| ·酶切及连接体系 | 第32-33页 |
| ·质粒小提，质粒大提，胶回收及PCR 产物纯化 | 第33页 |
| ·转化 | 第33页 |
| ·菌落PCR 筛选阳性克隆 | 第33-34页 |
| ·酶切鉴定 | 第34页 |
| ·测序 | 第34页 |
| ·细胞复苏 | 第34页 |
| ·细胞培养 | 第34-35页 |
| ·细胞冻存 | 第35页 |
| ·细胞瞬时转染质粒 | 第35-36页 |
| ·稳定转染细胞系筛选 | 第36页 |
| ·siRNA 干扰 | 第36-37页 |
| ·纺锤体检验点分析 | 第37-38页 |
| ·免疫印迹 | 第38页 |
| ·免疫沉淀 | 第38-39页 |
| ·Pull-down 实验 | 第39-40页 |
| ·免疫荧光 | 第40页 |
| ·荧光报告标签 | 第40页 |
| ·染色质免疫沉淀 | 第40-42页 |
| ·Chromatin Fractionation | 第42-43页 |
| 3 实验结果 | 第43-64页 |
| ·CDK5RAP2 与CDC20 之间存在相互作用 | 第43-45页 |
| ·CDK5RAP2 的小干扰RNA 的筛选 | 第45-46页 |
| ·CDK5RAP2 的抑制表达造成染色体发生错误分离现象 | 第46-47页 |
| ·CDK5RAP2 的抑制表达特异性的导致纺锤体装配检验点的缺失 | 第47-50页 |
| ·CDK5RAP2 的抑制表达导致纺锤体装配检验点蛋白BUBR1 和MAD2 的下调表达 | 第50-52页 |
| ·CDK5RAP2 的抑制表达影响了有丝分裂期检验点复合体组分在细胞内的分布 | 第52-53页 |
| ·CDK5RAP2 是BUBR1 和MAD2 的正向转录调节因子 | 第53-56页 |
| ·CDK5RAP2 蛋白结合到BUBR1 和MAD2 启动子上 | 第56-58页 |
| ·CDK5RAP2 的抑制表达降低Hela 细胞对 PACLITAXEL 和Doxorubicin 的药物敏感性 | 第58-61页 |
| ·CDK5RAP2 是化疗药物PACLITAXEL 和Doxorubicin 的共同药靶 | 第61-64页 |
| 4 讨论 | 第64-70页 |
| ·CDK5RAP2 对于纺锤体装配检验点的功能完整性，以及其在检验点系统对PACLITAXEL 和Nocodazole 的应答中都不可或缺 | 第64-65页 |
| ·CDK5RAP2 的抑制表达会促使CDC20 激活APC | 第65页 |
| ·CDK5RAP2 在BUBR1 启动子和MAD2 启动子上的结合位点的讨论 | 第65-66页 |
| ·CDK5RAP2 的抑制表达会造成染色体的不稳定 | 第66页 |
| ·CDK5RAP2 是肿瘤化疗药物的新药靶 | 第66-67页 |
| ·CDK5RAP2 是潜在的癌症治疗的靶点 | 第67-68页 |
| ·CDK5RAP2 作为肿瘤化疗药物新靶点的创新性以及对今后治疗的指导意义 | 第68-70页 |
| 参考文献 | 第70-82页 |
| 附录 | 第82-87页 |
| Ⅰ.文章中所用基因序列在NCBI 上的序列号 | 第82页 |
| Ⅱ.抗体稀释比例 | 第82-83页 |
| Ⅲ.ChIP 中所用引物 | 第83-84页 |
| Ⅳ.Pull-down 中构建pGEX-4T-1-CDK5RAP2 各个片段所用引物 | 第84-86页 |
| Ⅴ.构建HA-CDK5RAP2res 所需的引物和突变位点 | 第86页 |
| Ⅵ.文章中所涉及的siRNA 序列 | 第86-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
