| 常见英文缩略词 | 第1-8页 |
| 中文摘要 | 第8-11页 |
| 英文摘要 | 第11-15页 |
| 引言 | 第15-17页 |
| 第一章 脐带血CD34~+细胞的分离、培养、扩增和鉴定 | 第17-30页 |
| 引言 | 第17页 |
| 一、材料 | 第17-19页 |
| (一) 主要仪器 | 第17页 |
| (二) 主要实验材料 | 第17-19页 |
| (三) 主要溶液配制 | 第19页 |
| 二、方法 | 第19-22页 |
| (一) 脐带血来源 | 第19页 |
| (二) 6%羟乙基淀粉沉降法分离单核细胞 | 第19-20页 |
| (三) Ficoll淋巴细胞分离液法分离单核细胞 | 第20页 |
| (四) CD34~+细胞的磁珠标记和分选 | 第20-21页 |
| (五) 细胞存活率测定 | 第21页 |
| (六) CD34~+细胞体外液体扩增培养 | 第21页 |
| (七) 细胞免疫抗原的检测 | 第21-22页 |
| (八) 统计学处理 | 第22页 |
| 三、结果 | 第22-23页 |
| (一) 脐带血干细胞的分离 | 第22页 |
| (二) 无血清、无基质短期液体培养下脐血干细胞的体外扩增结果 | 第22-23页 |
| (三) 脐带血干细胞的鉴定 | 第23页 |
| 四、讨论 | 第23-27页 |
| (一) 脐带血单核细胞和CD34~+细胞的获取方法 | 第23-25页 |
| (二) CD34~+细胞培养基的安全性 | 第25页 |
| (三) CD34~+细胞的扩增的必要性及方法 | 第25-27页 |
| 参考文献 | 第27-30页 |
| 第二章 糖尿病裸鼠模型和下肢缺血模型的制备 | 第30-39页 |
| 引言 | 第30页 |
| 一、材料 | 第30-31页 |
| (一) 实验动物及饲料 | 第30页 |
| (二) 试验物品 | 第30-31页 |
| (三) 试验试剂 | 第31页 |
| 二、方法 | 第31-33页 |
| (一) 裸鼠的饲养及糖尿病模型的制备 | 第31-32页 |
| (二) 裸鼠下肢缺血模型的制备 | 第32页 |
| (三) 肢体功能的评估 | 第32页 |
| (四) 红外热成像系统检测下肢体温 | 第32-33页 |
| (五) 取材 | 第33页 |
| (六) 苏木素-伊红(HE)染色 | 第33页 |
| (七) 统计学处理 | 第33页 |
| 三、结果 | 第33-35页 |
| (一) 裸鼠体重、饮水及饮食量的变化 | 第33-34页 |
| (二) 糖耐量试验结果的比较 | 第34页 |
| (三) 生化指标变化 | 第34页 |
| (四) 下肢缺血后肢体变化 | 第34页 |
| (五) 下肢温度变化 | 第34页 |
| (六) 组织病理变化 | 第34-35页 |
| 四、讨论 | 第35-37页 |
| (一) 实验性糖尿病模型 | 第35-36页 |
| (二) 自发性糖尿病动物模型 | 第36页 |
| (三) 重症下肢缺血的判定 | 第36-37页 |
| 参考文献 | 第37-39页 |
| 第三章 脐带血干细胞移植治疗糖尿病鼠下肢缺血研究 | 第39-58页 |
| 引言 | 第39页 |
| 一、材料 | 第39-40页 |
| (一) 实验动物 | 第39页 |
| (二) 试验物品 | 第39-40页 |
| (三) 实验试剂 | 第40页 |
| 二、方法 | 第40-48页 |
| (一) 分离脐带血CD34~+细胞,进行培养,方法同第一部分 | 第40页 |
| (二) 按照第二部分方法制备糖尿病裸鼠下肢缺血模型 | 第40页 |
| (三) 细胞培养第7天,下肢缺血模型制作成功后进行细胞移植 | 第40-41页 |
| (四) 红外热成像系统测量体温变化 | 第41页 |
| (五) 裸鼠饲养28天后取标本进行免疫病理,分子生物学检测 | 第41页 |
| (六) CD31免疫组化检侧毛细血管密度 | 第41页 |
| (七) 实时定量逆转录一多聚酶链反应 | 第41-43页 |
| (八) Western blotting检测 | 第43-48页 |
| 三、结果 | 第48-50页 |
| (一) 移植细胞示踪 | 第48页 |
| (二) 双下肢温度的变化 | 第48页 |
| (三) 下肢缺血后肢体变化 | 第48-49页 |
| (四) 免疫组化检测 | 第49页 |
| (五) RT-PCR结果 | 第49页 |
| (六) Western blotting结果 | 第49-50页 |
| 四 讨论 | 第50-55页 |
| (一) 糖尿病下肢缺血采用干细胞移植进行治疗的优势和存在的问题 | 第50-51页 |
| (二) 为什么选择脐带血干细胞移植 | 第51-52页 |
| (三) TGF—β1和CD105与血管病变 | 第52-53页 |
| (四) 本实验在下肢缺血治疗中的特点 | 第53-54页 |
| (五) 细胞移植部位的选择 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-58页 |
| 研究结论 | 第58-70页 |
| 综述 | 第70-89页 |
| 个人简介 | 第89-90页 |
| 在读期间发表文章 | 第90-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
