猪戊型肝炎间接ELISA诊断试剂盒的研制
| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-11页 |
| 1 引言 | 第11-19页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第11-12页 |
| ·戊型肝炎病毒的研究进展 | 第12-18页 |
| ·病原 | 第12-13页 |
| ·基因组结构 | 第13页 |
| ·流行病学 | 第13-14页 |
| ·临床症状与病理改变 | 第14-15页 |
| ·诊断抗原 | 第15-16页 |
| ·诊断方法 | 第16-18页 |
| ·研究内容 | 第18-19页 |
| ·HEV ORF2蛋白部分片段的原核表达 | 第18页 |
| ·HEV间接ELISA诊断试剂盒的组装 | 第18-19页 |
| 2 材料和方法 | 第19-27页 |
| ·实验材料 | 第19-20页 |
| ·猪粪便和血清 | 第19页 |
| ·主要生化试剂 | 第19页 |
| ·主要仪器 | 第19页 |
| ·引物设计与合成 | 第19-20页 |
| ·载体与菌株 | 第20页 |
| ·诊断抗原的制备 | 第20-24页 |
| ·提取病毒RNA | 第20页 |
| ·反转录-PCR | 第20-21页 |
| ·PCR产物的回收和克隆 | 第21页 |
| ·PCR产物的转化 | 第21-22页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第22页 |
| ·序列分析 | 第22页 |
| ·重组表达质粒的筛选与鉴定 | 第22-23页 |
| ·融合蛋白的诱导表达 | 第23页 |
| ·表达产物的Western blot分析 | 第23-24页 |
| ·猪戊型肝炎病毒抗体间接ELISA诊断方法的建立 | 第24-27页 |
| ·操作程序 | 第24页 |
| ·间接ELISA方法相关条件的确定试验 | 第24-25页 |
| ·特异性试验 | 第25页 |
| ·重复性试验 | 第25页 |
| ·敏感性实验 | 第25页 |
| ·现地血清样品检测 | 第25-26页 |
| ·酶标板的制备及保存试验 | 第26页 |
| ·试剂稳定性及保存试验 | 第26页 |
| ·试剂盒的组装 | 第26-27页 |
| 3 结果 | 第27-39页 |
| ·基因片段的扩增结果 | 第27页 |
| ·测序结果 | 第27-28页 |
| ·重组表达质粒的鉴定 | 第28-29页 |
| ·融合蛋白的表达 | 第29-30页 |
| ·Western blot分析 | 第30页 |
| ·ELISA反应条件的优化 | 第30-34页 |
| ·最适封闭液的确定 | 第30页 |
| ·最适的抗原包被浓度和血清稀释度 | 第30-31页 |
| ·最适的血清工作时间 | 第31-32页 |
| ·最适的酶标二抗稀释倍数和作用时间 | 第32-33页 |
| ·底物的作用时间 | 第33-34页 |
| ·间接ELISA结果的判断 | 第34页 |
| ·特异性实验 | 第34页 |
| ·重复性试验 | 第34-35页 |
| ·批内重复性试验 | 第34-35页 |
| ·批间重复性试验 | 第35页 |
| ·敏感性试验 | 第35页 |
| ·现地血清样品检测 | 第35-37页 |
| ·青海地区人畜戊型肝炎病毒抗体的检测 | 第35-37页 |
| ·吉林省猪戊型肝炎病毒抗体的检测 | 第37页 |
| ·酶标板的保存试验 | 第37-38页 |
| ·试剂稳定性及保存试验 | 第38页 |
| ·洗液稳定性及保存试验 | 第38页 |
| ·标准血清的保存期试验 | 第38页 |
| ·工作浓度酶标抗体的保存期试验 | 第38页 |
| ·底物液稳定性和保存试验 | 第38页 |
| ·试剂盒的初步组装 | 第38-39页 |
| 4 讨论 | 第39-41页 |
| 5 结论 | 第41-42页 |
| 致谢 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-47页 |
| 附录 | 第47-49页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第49页 |
