| 中文摘要 | 第1-13页 |
| Abstract | 第13-19页 |
| 符号说明 | 第19-21页 |
| 第一章 前言 | 第21-36页 |
| 第一节 植物磷转运体 | 第21-26页 |
| ·植物磷转运体的研究进展 | 第21-24页 |
| ·Pht1基因家族 | 第21-22页 |
| ·Pht2基因家族 | 第22页 |
| ·线粒体中的Pht3基因家族 | 第22-23页 |
| ·植物质体磷转运体基因 | 第23-24页 |
| ·动物Na~+-H_2PO_4~-转运体 | 第24-25页 |
| ·Ⅰ型Na~+-H_2PO_4~-转运体 | 第24页 |
| ·Ⅱ型Na~+-H_2PO_4~-转运体 | 第24页 |
| ·Ⅲ型Na~+-H_2PO_4~-转运体 | 第24-25页 |
| ·植物中的Na~+-H_2PO_4~-转运体-质体中PHT4家族磷转运体 | 第25-26页 |
| 第二节 植物中的黄素结合的单氧化酶 | 第26-34页 |
| ·动物黄素结合单氧化酶的功能 | 第26-27页 |
| ·植物黄素结合单氧化酶 | 第27-34页 |
| ·黄素结合单氧化酶的结构和功能分析 | 第28页 |
| ·拟南芥YUCCA基因家族 | 第28-30页 |
| ·FMO1(AtFMO)基因 | 第30-31页 |
| ·FMO1在EDS1/PAD4介导的抗病途径中的作用 | 第30-31页 |
| ·FMO1在SAR中的作用 | 第31页 |
| ·FMO1抵抗病原体可能的作用机制 | 第31页 |
| ·FMO_(GS-OX)基因 | 第31-34页 |
| ·Glucosinolate | 第31-33页 |
| ·风味作用 | 第32页 |
| ·杀菌杀虫作用 | 第32页 |
| ·诱虫作用 | 第32页 |
| ·化学防御癌症作用 | 第32-33页 |
| ·FMO_(GS-OX) | 第33-34页 |
| 本工作的目的和意义 | 第34-36页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第36-60页 |
| 1 植物材料及培养条件 | 第36页 |
| 2 菌株及其质粒载体 | 第36-38页 |
| 3 实验方法 | 第38-60页 |
| ·盐芥总RNA的提取和cDNA合成 | 第38-40页 |
| ·盐芥和拟南芥总RNA的提取 | 第38页 |
| ·mRNA的分离 | 第38-39页 |
| ·盐芥和拟南芥cDNA合成 | 第39-40页 |
| ·第一链cDNA的合成 | 第39-40页 |
| ·引物延伸法合成双链cDNA | 第40页 |
| ·TsFMO1基因的克隆 | 第40-42页 |
| ·TsFMO1基因cDNA片段的分离 | 第40-41页 |
| ·通过RACE方法克隆盐芥TsFMO1全长序列 | 第41-42页 |
| ·全长cDNA序列的获得和生物信息学分析 | 第42页 |
| ·盐芥基因组Southern blot分析 | 第42-43页 |
| ·盐芥基因组DNA的提取 | 第42-43页 |
| ·Southern blot分析 | 第43页 |
| ·Real-time RT-PCR分析ThNPT和TsFMO1在盐芥中的表达模式 | 第43-45页 |
| ·过表达载体和RNAi载体的重组和鉴定 | 第45-46页 |
| ·过表达载体的构建 | 第45页 |
| ·RNAi载体的构建 | 第45-46页 |
| ·TsFMO1蛋白原核细胞表达 | 第46-47页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第46页 |
| ·原核表达及蛋白纯化 | 第46-47页 |
| ·样品诱导 | 第46页 |
| ·大量制备大肠杆菌可溶性蛋白 | 第46页 |
| ·利用His Bind树脂对可溶性蛋白进行纯化 | 第46-47页 |
| ·抗体制备和Western Blot | 第47-49页 |
| ·抗原的准备 | 第47页 |
| ·动物接种 | 第47-48页 |
| ·抗血清效价(Serum titres)检测(Western blotting法) | 第48-49页 |
| ·酵母突变体功能互补分析 | 第49-50页 |
| ·酵母表达载体的构建 | 第49页 |
| ·酵母遗传转化所用溶液和培养基 | 第49-50页 |
| ·酵母突变体对还原剂敏感性测试 | 第50页 |
| ·盐芥和拟南芥的转化和筛选 | 第50-52页 |
| ·遗传转化 | 第50-51页 |
| ·转基因植株的筛选 | 第51页 |
| ·转基因盐芥和拟南芥的分子生物学检测 | 第51-52页 |
| ·PCR检测 | 第51-52页 |
| ·利用Real-Time RT-PCR进行转基因后代中目的基因表达量检测 | 第52页 |
| ·叶绿体的分离和磷转运活性、总磷含量的测定 | 第52-55页 |
| ·试剂 | 第52-53页 |
| ·分离步骤 | 第53-54页 |
| ·叶绿体磷转运活性的测定 | 第54页 |
| ·不同pH下测定叶绿体磷吸收速率 | 第54页 |
| ·测定不同钠离子浓度条件下叶绿体磷吸收速率 | 第54页 |
| ·测定不同磷酸盐浓度条件下叶绿体磷吸收速率 | 第54页 |
| ·测定不同一价阳离子条件下叶绿体磷吸收速率 | 第54页 |
| ·叶绿体中总磷含量的测定 | 第54-55页 |
| ·利用钠离子荧光探针,测定叶绿体中钠离子含量 | 第55页 |
| ·原生质体的游离与纯化 | 第55-56页 |
| ·细胞ROS积累的测定 | 第56-57页 |
| ·荧光强度的定量计算 | 第57页 |
| ·水培盐芥组织中Na~+离子含量的测定 | 第57-58页 |
| ·光合参数的测定 | 第58页 |
| ·转基因拟南芥的抗逆性测试 | 第58-59页 |
| ·拟南芥种子在含NaCl的MS培养基上的萌发 | 第58页 |
| ·拟南芥种子在含甘露醇的MS培养基上萌发 | 第58页 |
| ·拟南芥种子在含H_2O_2的MS培养基上的萌发 | 第58页 |
| ·拟南芥小苗生物量测定 | 第58-59页 |
| ·转基因拟南芥的耐低磷性分析 | 第59页 |
| ·统计学分析 | 第59-60页 |
| 第三章 结果与分析 | 第60-120页 |
| 第一节 盐芥ThNPT基因的功能分析 | 第60-92页 |
| ·盐芥ThNPT的表达分析 | 第60-63页 |
| ·器官表达分析 | 第60页 |
| ·胁迫条件下表达分析 | 第60-63页 |
| ·转基因拟南芥和盐芥的获得与鉴定 | 第63-65页 |
| ·筛选 | 第63页 |
| ·PCR鉴定 | 第63-64页 |
| ·T2和T3代拟南芥和盐芥的获得 | 第64页 |
| ·转基因后代中目的基因的表达分析 | 第64-65页 |
| ·ThNPT编码一个叶绿体中的Na~+/Pi转运体 | 第65-73页 |
| ·盐芥完整叶绿体磷吸收速率的测定 | 第65-69页 |
| ·不同pH下叶绿体磷吸收速率的测定 | 第66页 |
| ·不同Na~+浓度下叶绿体磷吸收速率的测定 | 第66-67页 |
| ·不同磷浓度下叶绿体磷吸收速率的测定 | 第67-68页 |
| ·不同一价阳离子对叶绿体磷吸收速率的影响 | 第68-69页 |
| ·转基因盐芥的叶绿体磷吸收速率测定 | 第69-70页 |
| ·转基因盐芥完整叶绿体磷含量的测定 | 第70页 |
| ·利用钠离子荧光探针,测定完整叶绿体中钠离子含量 | 第70-73页 |
| ·过表达ThNPT产生的生物学效应 | 第73-81页 |
| ·转基因盐芥的表型分析 | 第73页 |
| ·光合参数的测定 | 第73-74页 |
| ·水培条件下盐芥ThNPT功能分析 | 第74-81页 |
| ·表型观察和生物量的测定 | 第75-76页 |
| ·Na~+含量的测定 | 第76-78页 |
| ·Pi含量的测定 | 第78-79页 |
| ·光合参数的测定 | 第79-81页 |
| ·转基因拟南芥的抗逆性分析 | 第81-86页 |
| ·转基因拟南芥的抗盐性分析 | 第81-85页 |
| ·种子耐盐萌发 | 第81-83页 |
| ·转基因拟南芥在含盐平板上的生长 | 第83-85页 |
| ·转基因拟南芥的耐低磷性分析 | 第85-86页 |
| 小结与讨论 | 第86-92页 |
| 第二节 盐芥TsFMO1基因的克隆和功能分析 | 第92-120页 |
| ·盐芥TsFMO1的克隆和初步分析 | 第92-102页 |
| ·盐芥TsFMO1序列的扩增 | 第92-93页 |
| ·盐芥TsFMO1的生物信息学分析 | 第93-94页 |
| ·盐芥TsFMO1的拷贝数鉴定 | 第94页 |
| ·盐芥TsFMO1的表达分析 | 第94-97页 |
| ·器官表达分析 | 第94-95页 |
| ·胁迫条件下表达分析 | 第95-97页 |
| ·酵母功能互补 | 第97-98页 |
| ·融合蛋白在大肠杆菌中的表达和抗体制备 | 第98-100页 |
| ·过表达和RNAi载体的构建与鉴定 | 第100-102页 |
| ·过表达载体的构建与鉴定 | 第100页 |
| ·RNAi干扰载体的构建 | 第100-102页 |
| ·TsFMO1过表达和RNAi转基因盐芥、拟南芥的获得与鉴定 | 第102-104页 |
| ·筛选 | 第102页 |
| ·PCR鉴定 | 第102-103页 |
| ·T2和T3代拟南芥和盐芥的获得 | 第103页 |
| ·转基因材料中FMO1的表达分析 | 第103-104页 |
| ·转基因盐芥的表型分析和ROS测定 | 第104-107页 |
| ·转基因拟南芥的抗盐分析 | 第107-108页 |
| ·种子萌发试验 | 第107-108页 |
| ·转基因拟南芥的抗旱性分析 | 第108-109页 |
| ·转基因拟南芥的抗旱萌发 | 第108-109页 |
| ·转基因拟南芥在含甘露醇培养基上生长 | 第109页 |
| ·拟南芥抗氧化胁迫处理 | 第109-112页 |
| ·拟南芥种子在含H_2O_2的MS培养基上萌发 | 第109-110页 |
| ·拟南芥小苗在含H_2O_2的MS平板的生物量测定 | 第110-112页 |
| ·其它盐芥TsFMO基因的克隆和表达分析 | 第112-117页 |
| ·其它盐芥TsFMO基因的克隆 | 第112-113页 |
| ·不同器官中的表达分析 | 第113-114页 |
| ·不同胁迫条件下的表达分析 | 第114-116页 |
| ·RNAi干扰载体的构建 | 第116-117页 |
| 小结与讨论 | 第117-120页 |
| 第四章 展望 | 第120-123页 |
| 参考文献 | 第123-134页 |
| 致谢 | 第134-135页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第135-137页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第137-138页 |
| 附录 | 第138-176页 |
