| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-15页 |
| 前言 | 第15-39页 |
| 1 微生物的群体感应 | 第15-28页 |
| ·群体感应的发展历史 | 第15-16页 |
| ·细菌群体感应系统 | 第16-20页 |
| ·细菌群体感应系统的形成及调节机制 | 第20-23页 |
| ·细菌群体感应系统的研究方法 | 第23-24页 |
| ·细菌群体感应系统的应用 | 第24-26页 |
| ·细菌群体感应系统意义及前景 | 第26-28页 |
| 2 细菌的第二信使 | 第28-37页 |
| ·c-di-GMP的代谢途径 | 第29-31页 |
| ·c-di-GMP的作用机制 | 第31-34页 |
| ·c-di-GMP的生物功能 | 第34-36页 |
| ·展望 | 第36-37页 |
| 3 本论文的研究意义 | 第37-38页 |
| 4 本论文的研究思路 | 第38-39页 |
| 第一部分 群体感应对铜绿假单胞菌致病因子产生的调控 | 第39-53页 |
| 1 前言 | 第39-40页 |
| 2 实验材料和仪器 | 第40页 |
| ·菌株和培养基 | 第40页 |
| 3 实验方法 | 第40-46页 |
| ·群体感应缺失对菌株生长曲线的影响 | 第41页 |
| ·群体感应缺失对菌株形态的影响 | 第41-42页 |
| ·细胞运动能力的检测 | 第42-43页 |
| ·细胞生理生化指标的测定 | 第43-46页 |
| 4 实验结果 | 第46-52页 |
| ·群体感应缺失对菌株的影响 | 第46-48页 |
| ·细胞运动 | 第48-49页 |
| ·毒性因子的产生 | 第49-50页 |
| ·细胞对抗生素的敏感性 | 第50页 |
| ·生物膜形成能力的比较 | 第50-52页 |
| 5 小结 | 第52页 |
| 6 讨论 | 第52-53页 |
| 第二部分 环二鸟苷酸对铜绿假单胞菌因子产生的调控 | 第53-77页 |
| 1 前言 | 第53页 |
| 2 材料与方法 | 第53-60页 |
| ·材料 | 第53-54页 |
| ·组成型表达载体的构建 | 第54-57页 |
| ·PAO1电转化条件的优化 | 第57-58页 |
| ·c-di-GMP降解酶和合成酶的表达 | 第58-60页 |
| 3 实验结果 | 第60-75页 |
| ·组成型表达载体pMF54A载体的构建和验证 | 第60-62页 |
| ·电击转化PAO1条件的优化 | 第62页 |
| ·二鸟苷酸环化酶和磷酸二酯酶基因的克隆 | 第62-69页 |
| ·环二鸟苷酸对野生菌PAO1生物膜形成能力的影响 | 第69-71页 |
| ·转录融合重组载体的构建 | 第71页 |
| ·环二鸟苷酸对野生型PAO1生物膜的影响 | 第71-72页 |
| ·定量PCR检测目的基因在PAO1中的表达 | 第72-73页 |
| ·c-di-GMP对细菌生长速度的影响 | 第73-74页 |
| ·c-di-GMP对细胞运动性的影响 | 第74页 |
| ·c-di-GMP对细胞毒性的影响 | 第74-75页 |
| 4 小结 | 第75-76页 |
| 5 讨论 | 第76-77页 |
| 第三部分 群体感应和环二鸟苷酸在铜绿假单胞菌致病因子产生中的相关性研究 | 第77-87页 |
| 1 前言 | 第77页 |
| 2 实验材料和方法 | 第77-80页 |
| ·细菌RNA的提取 | 第77-78页 |
| ·定量PCR模板的制备 | 第78-79页 |
| ·定量PCR的引物 | 第79页 |
| ·细菌对细胞毒性的测定 | 第79-80页 |
| ·外源加入的环二鸟苷酸对细菌生物膜形成的影响 | 第80页 |
| ·外源加入的信号分子对细菌生物膜形成的影响 | 第80页 |
| 3 实验结果 | 第80-86页 |
| ·c-di-GMP对野生型和群体感应缺失菌株生物膜的影响 | 第80-82页 |
| ·c-di-GMP对群体感应突变株的影响 | 第82-83页 |
| ·c-di-GMP对细菌抗生素耐药性的影响 | 第83页 |
| ·外源加入c-di-GMP对生物膜形成的影响 | 第83-84页 |
| ·群体感应双缺失菌株加入信号分子后对环二鸟苷酸作用的影响 | 第84页 |
| ·c-di-GMP对细菌产生群体感应信号分子的影响 | 第84-86页 |
| 4 小结 | 第86页 |
| 5 讨论 | 第86-87页 |
| 第四部分 c-di-GMP影响铜绿假单胞菌生物膜形成的机制 | 第87-97页 |
| 1 前言 | 第87页 |
| 2 实验材料和方法 | 第87-89页 |
| ·细菌对生物和非生物介质帖附的影响 | 第87-89页 |
| 3 实验结果 | 第89-96页 |
| ·细菌对非生物介质贴附能力的比较 | 第89-93页 |
| ·对生物介质贴附能力的影响 | 第93-94页 |
| ·细菌产生多糖及多糖对细菌黏附的影响 | 第94页 |
| ·环二鸟苷酸对细胞表面疏水性的影响 | 第94-95页 |
| ·细胞表面鞭毛和纤毛的观察 | 第95-96页 |
| 4 小结 | 第96页 |
| 5 讨论 | 第96-97页 |
| 第五部分 总结与展望 | 第97-99页 |
| 第六部分 参考文献 | 第99-111页 |
| 第七部分 致谢 | 第111-112页 |
| 第八部分 在读期间发表和提交的研究论文 | 第112页 |
