| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 英文缩略表 | 第12-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-24页 |
| ·口蹄疫 | 第13-17页 |
| ·口蹄疫病毒的一般特征 | 第13-14页 |
| ·口蹄疫病毒的基因组结构 | 第14页 |
| ·口蹄疫病毒结构蛋白的结构及功能 | 第14-15页 |
| ·口蹄疫病毒的抗原结构 | 第15-17页 |
| ·抗原位点和抗原表位 | 第15-16页 |
| ·口蹄疫病毒的抗原位点和抗原表位 | 第16页 |
| ·口蹄疫病毒抗原表位的研究目标 | 第16-17页 |
| ·口蹄疫疫苗研究进展 | 第17-19页 |
| ·传统疫苗 | 第17页 |
| ·基因工程亚单位疫苗 | 第17-18页 |
| ·合成肽疫苗 | 第18页 |
| ·病毒活载体疫苗 | 第18页 |
| ·核酸疫苗 | 第18-19页 |
| ·表位展示疫苗的研究 | 第19-21页 |
| ·病毒样颗粒表位展示疫苗的研究 | 第19-20页 |
| ·HBc病毒样颗粒载体的研究进展 | 第20-21页 |
| ·腺病毒载体疫苗研究进展 | 第21-22页 |
| ·腺病毒概述 | 第21页 |
| ·腺病毒载体的分类 | 第21-22页 |
| ·腺病毒载体在FMD疫苗研究中的应用 | 第22页 |
| ·本试验室的研究基础 | 第22页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第22-24页 |
| 第二章 Asia1型FMDV模拟表位S7在HBc载体N末端的展示 | 第24-29页 |
| ·材料与方法 | 第24-26页 |
| ·细胞和载体 | 第24页 |
| ·工具酶与主要试剂 | 第24页 |
| ·仪器设备 | 第24页 |
| ·表位基因的设计与合成 | 第24-25页 |
| ·构建pcDNA3.1(+)-HBC-NS7重组质粒 | 第25-26页 |
| ·表位基因和载体片段的制备 | 第25页 |
| ·表位基因和载体片段的连接、转化及重组质粒的鉴定 | 第25-26页 |
| ·pcDNA3.1(+)-HBC-NS7重组质粒瞬时转染BHK-21细胞 | 第26页 |
| ·间接免疫荧光(IFA)检测重组质粒的表达效果 | 第26页 |
| ·结果 | 第26-28页 |
| ·表位单核苷酸链退火产物鉴定 | 第26-27页 |
| ·阳性重组质粒的鉴定 | 第27页 |
| ·重组质粒在BHK-21的表达及S7展示于HBc载体N末端的反应活性 | 第27-28页 |
| ·小结 | 第28页 |
| ·讨论 | 第28-29页 |
| 第三章 O型FMDV真实表位和模拟表位在HBc载体MIR区和N末端的展示 | 第29-38页 |
| ·材料与方法 | 第29-32页 |
| ·细胞和载体 | 第29页 |
| ·工具酶与主要试剂 | 第29页 |
| ·仪器设备 | 第29页 |
| ·同源建模 | 第29-30页 |
| ·表位基因的合成 | 第30-31页 |
| ·在HBc载体MIR区和N端展示O型FMDV真实表位和模拟表位重组质粒的构建 | 第31-32页 |
| ·表位基因和载体片段的制备 | 第31页 |
| ·表位基因和载体片段的连接、转化及重组质粒的鉴定 | 第31-32页 |
| ·重组质粒瞬时转染BHK-21细胞 | 第32页 |
| ·间接免疫荧光检测展示表位与相应单抗的反应活性 | 第32页 |
| ·结果 | 第32-34页 |
| ·展示于HBc载体MIR区表位的同源建模 | 第32-33页 |
| ·阳性重组质粒的鉴定 | 第33页 |
| ·重组质粒在BHK-21的表达及S7展示于HBc载体N末端的反应活性 | 第33-34页 |
| ·小结 | 第34页 |
| ·讨论 | 第34-38页 |
| 第四章 HBc载体展示的FMDV中和表位在重组腺病毒中的表达 | 第38-49页 |
| ·材料与方法 | 第38-43页 |
| ·细胞、质粒 | 第38页 |
| ·工具酶和主要试剂 | 第38页 |
| ·仪器设备 | 第38页 |
| ·引物的设计与合成 | 第38-39页 |
| ·构建HBc载体MIR区和N区各展示一个表位的双表位重组质粒 | 第39页 |
| ·双表位与HBc嵌合蛋白的瞬时表达及其病毒样颗粒的观察 | 第39页 |
| ·间接免疫荧光检测表位的反应活性 | 第39页 |
| ·HBc-dS7和HBc-dO1病毒样颗粒的观察 | 第39页 |
| ·构建重组腺病毒质粒 | 第39-41页 |
| ·目的基因的扩增 | 第39-40页 |
| ·重组腺病毒穿梭质粒的构建及鉴定 | 第40页 |
| ·重组腺病毒质粒的制备 | 第40-41页 |
| ·重组腺病毒质粒的鉴定 | 第41页 |
| ·重组腺病毒质粒的扩增及Pac Ⅰ线性化 | 第41页 |
| ·重组腺病毒的制备 | 第41-42页 |
| ·转染前AD-293细胞的准备 | 第41-42页 |
| ·经Pac Ⅰ线性化的重组腺病毒质粒转染AD-293细胞 | 第42页 |
| ·重组腺病毒的传代 | 第42页 |
| ·重组腺病毒的鉴定 | 第42-43页 |
| ·间接免疫荧光检测双表位-HBc嵌合蛋白的表达 | 第42页 |
| ·Dot-ELISA检测检测双表位-HBc嵌合蛋白的表达 | 第42-43页 |
| ·噬斑法测定重组病毒的滴度 | 第43页 |
| ·结果 | 第43-47页 |
| ·pcDNA 3.1(+)-HBc-dS7和PcDNA3.1(+)-HBc-dO1双表位重组质粒在BHK-21细胞中的表达 | 第43-44页 |
| ·HBc-dS7和HBc-dO1病毒样颗粒形态 | 第44页 |
| ·目的基因的扩增结果 | 第44页 |
| ·重组穿梭质粒的鉴定 | 第44-45页 |
| ·重组腺病毒质粒的鉴定 | 第45-46页 |
| ·重组腺病毒的鉴定 | 第46-47页 |
| ·重组腺病毒引起的CPE | 第46页 |
| ·间接免疫荧光检测HBc-dS7、HBc-dO1嵌合蛋白的表达 | 第46-47页 |
| ·Dot-ELISA检测检测HBc-dS7、HBc-dO1嵌合蛋白的表达 | 第47页 |
| ·重组腺病毒滴度的测定 | 第47页 |
| ·小结 | 第47-48页 |
| ·讨论 | 第48-49页 |
| 第五章 全文结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 作者简介 | 第57页 |
